[发明专利]鼠李糖乳杆菌M8、鼠李糖乳杆菌SLP及其制备方法

说明书

技术领域

本发明涉及一种鼠李糖乳杆菌菌株，还涉及鼠李糖乳杆菌的一种工程菌及其制备方法。 

背景技术

目前，利用表层蛋白(即S-层蛋白)在人体肠道中定植这一特性，国外已有部分研究和报道，有些已应用于临床治疗，比如幽门螺杆菌感染所引起的婴儿严重腹泻等，其效果非常显著。然而，我国在益生菌定植培养方面的研究，一直进展缓慢，仅在医学方面对病原微生物的定植能力有过相关的研究。近年来，对于功能性益生菌在食品上的应用得到国内学者和大众的肯定，在该领域方面的功能性食品也层出不穷，如何提高这些功能性食品在人体消化道内的积极功效，便逐渐引起国内学者的关注。 

乳酸菌便是一种存在于人类体内的益生菌，是发酵糖类主要产物为乳酸的一类无芽孢、革兰氏染色阳性细菌的总称，其因能够将碳水化合物发酵成乳酸而得名；绝大部分的乳酸菌都是人体内必不可少的且具有重要生理功能的菌群，其广泛存在于人体的肠道中，能够帮助消化，有助人体肠脏的健康，因此乳酸菌常被视为健康食品添加在酸奶之内。鼠李糖乳杆菌是乳酸菌中一种，其可顺利通过胃酸、胆盐直接进入肠道，支持良好消化功能，能快速建立肠道优势益生菌群落。鼠李糖乳杆菌对轮状病毒引起的急性胃肠炎具有改善效果，可预防及减短幼童腹泻时间，调节人体肠道，具有改善胃肠健康之功效。鼠李糖乳杆菌已应用于胶囊、锭剂及粉末类之营养补给食品。鼠李糖乳杆菌也可添加到酸奶、奶粉及乳酸菌饮料等功能性诉求的食品中。然而，由于鼠李糖乳杆菌肠道黏附能力较差，因而限制了其在功能性食品中的应用。 

乳酸菌表层蛋白在肠道中不会被各种消化酶所消化，并且能耐胆汁的作用，因此可考虑将含S-层蛋白的乳酸菌开发成益生菌或是作为抗原抗体的载体。更重要的是，已有的大量研究和实验均已经证实，S-层蛋白还能够用于益生菌(尤其是乳酸菌)在肠道中的定植，能大大提高益生菌在肠道中的粘附能力。然而，目前已知的含有S-层蛋白的乳酸菌并不多，GENBANK中收录的也不超过20种，而且对于这些乳酸菌产生的S-层蛋白的功能及机理的研究也很不透彻。由于这些乳酸菌的黏附能力强弱不一，因此严重制约了乳酸菌在功能性食品中的应用。 

发明内容

本发明要解决的技术问题是克服现有技术的不足，提供一株鼠李糖乳杆菌(Lactobacillusrhamnosus)菌株，并提供由该菌株通过一种简单、低成本的方法制备得到的一株鼠李糖乳杆菌SLP，该鼠李糖乳杆菌SLP在人体肠道中黏附能力大大增强，能够有效强化鼠李糖乳杆菌在人体消化道中的积极功效。 

为解决上述技术问题，本发明的基本思路就是从不同分离源中筛选到富含S-层蛋白的乳酸菌株，再对S-层蛋白进行提纯和定量分析，并将S-层蛋白编码基因克隆到不含S-层蛋白的益生性乳酸菌(例如鼠李糖乳杆菌)中使其高效表达。为此，本发明首先提供了一株鼠李糖乳杆菌M8，其特征在于：所述鼠李糖乳杆菌M8是保存于中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心且保藏号为CGMCC No.3002的菌株。该菌株是从发酵肉中分离获得，通过平板划线分离纯化得到，经16S rRNA鉴定为鼠李糖乳杆菌。该菌株的保藏单位为中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心CGMCC，保藏单位地址位于北京市朝阳区大屯路的中国科学院微生物研究所，保藏日期为2009年4月7日，该菌株被命名为鼠李糖乳杆菌M8(Lr.M8)。 

上述提供的鼠李糖乳杆菌M8可用于进一步制备本发明的工程菌——鼠李糖乳杆菌SLP，所述鼠李糖乳杆菌SLP是在权利要求1所述鼠李糖乳杆菌CGMCC No.3002中表达有乳酸菌表层蛋白基因的工程菌。上述的鼠李糖乳杆菌SLP中，所述乳酸菌S-层蛋白优选是指瑞士乳杆菌(Lactobacillus helveticus)表层蛋白，该瑞士乳杆菌菌株分离自日常食用泡菜，通过平板划线分离纯化得到，经16SrRNA鉴定为瑞士乳杆菌。经过我们的反复实验，发现选用优选的瑞士乳杆菌S-层蛋白能够稳定地导入到本发明上述的鼠李糖乳杆菌M8中，并且能稳定地得到本发明的鼠李糖乳杆菌SLP，且本发明选用的瑞士乳杆菌S-层蛋白对宿主菌体无毒性，其基因资源也能够简单、方便地取得。 

上述的鼠李糖乳杆菌SLP中，所述瑞士乳杆菌表层蛋白占所述鼠李糖乳杆菌SLP菌体蛋白的30％～60％。现有的鼠李糖乳杆菌并不分泌S-层蛋白，但本发明提供的鼠李糖乳杆菌SLP的S-层蛋白分泌量较野生型鼠李糖乳杆菌大大增加，相比瑞士乳杆菌分泌量也有较大提高。