[发明专利]一种基于微小RNA调控可在肿瘤细胞内特异性增殖的重组腺病毒载体、其构建方法及其用途

权利要求书

1.一种重组腺病毒载体，其特征在于：该腺病毒载体的至少一个增殖必需基因的3’非翻译区中至少插入有一个微小RNA靶位点核苷酸序列，所述微小RNA在肿瘤细胞中表达缺失或降低而在正常细胞中表达正常。

2.根据权利要求1所述的重组腺病毒载体，其特征在于所述微小RNA可以选自let-7，miR-15，miR-16，miR-18，miR-29，miR-34，mi R-101，miR-127，miR-128，miR-181和miR-223中的至少一种。

3.根据权利要求1所述的重组腺病毒载体，其特征在于所述微小RNA靶位点序列由1个或多个相同微小RNA靶位点序列以串联重复的方式构成。

4.根据权利要求1所述的重组腺病毒载体，其特征在于所述微小RNA靶位点序列由1个或多个不同微小RNA靶位点序列以连续串联或间隔串联的方式构成。

5.根据权利要求1所述的重组腺病毒载体，其特征在于所述腺病毒增殖必需基因选自腺病毒早期表达基因：E1A，E1B，E2和E4中的至少一个。

6.根据权利要求1所述的重组腺病毒载体，其特征在于所述腺病毒增殖必需基因选自腺病毒晚期表达基因。

7.根据权利要求1所述的重组腺病毒载体，其特征在于重组腺病毒基因组中还可操作地连接有外源基因，所述外源基因选自抑癌基因、血管抑制基因、细胞因子基因，前药转换酶基因，细胞凋亡基因，抗体基因和疫苗基因中的至少一种。

8.根据权利要求1所述的重组腺病毒载体，其特征在于所述重组腺病毒还可操作地连接有选自缺氧反应元件、细胞S期特异性启动子、甲胎蛋白增强子及启动子、癌胚抗原增强子及启动子、酪氨酸酶增强子及启动子、尿激酶纤维蛋白激活剂增强子及启动子、ErbB2增强子及启动子、ErbB3增强子及启动子、ErbB4增强子及启动子、DF3乳腺癌相关抗原增强子、前列腺素特异性抗原增强子及启动子、腺血管舒缓素增强子及启动子、EB病毒中的Orip、EB病毒Orip中的FR增强子和EB病毒BamHI C-启动子中的至少一种顺式作用元件，所述顺式作用元件调控所述增殖必需基因的转录。

9.根据权利要求1所述重组腺病毒载体的构建方法，其特征在于在所述腺病毒至少一个增殖必需基因的3’非翻译区中至少插入有一个微小RNA靶位点核苷酸序列，所述微小RNA在肿瘤细胞中表达缺失或降低而在正常细胞中表达正常。

10.根据权利要求1-8中任一项所述的重组腺病毒载体的用途，其特征在于所述重组腺病毒用于选择性地在缺乏或降低相应微小RNA表达的肿瘤细胞中增殖，而在正常表达该微小RNA的正常细胞内不增殖。

11.根据权利要求7所述的重组腺病毒载体的用途，其特征在于所述重组腺病毒用于使在其基因组中可操作地连接的的外源基因选择性地在缺乏或降低相应微小RNA表达的肿瘤细胞中表达，而在正常表达该微小RNA的正常细胞内不表达。