[发明专利]布氏锥虫亮氨酰tRNA合成酶活性的检测方法

权利要求书

1、一种布氏锥虫亮氨酰tRNA合成酶活性的检测方法，其特征在于，包括如下步骤：

步骤一，取预反应液，加到含DMSO的离心管中，水浴；

步骤二，向离心管中加入ATP，使ATP的终浓度为2mM-8mM，混匀，水浴；

步骤三，从水浴后的离心管中取反应液滴加在定性滤纸片上，在三氯乙酸溶液中洗涤定性滤纸片；

步骤四，在酒精中漂洗定性滤纸片；

步骤五，将滤纸片置于红外灯下烘干；

步骤六，闪烁计数仪检测。

2、根据权利要求1所述的布氏锥虫亮氨酰tRNA合成酶活性的检测方法，其特征是，步骤一中，所述预反应液，其1000ul预反应液的组分为，250ul摩尔浓度为250mM、pH值为7.8的HEPES-KOH，250ul摩尔浓度为25mM的MgCl₂，250ul摩尔浓度为225mM的KCl，125ul摩尔浓度10mM的DTT，12.5ul质量分数为2％的BSA，25ul质量体积比为20mg/ml的tRNA，50ul活性单位为25U的锥虫亮氨酰tRNA合成酶，37.5ul浓度为100μCi/ml的同位素标记的亮氨酸；将上述组分混合即得预反应液。

3、根据权利要求1所述的布氏锥虫亮氨酰tRNA合成酶活性的检测方法，其特征是，步骤一和步骤二中，所述水浴具体为，温度为20℃-37℃，时间为5-60分钟。

4、根据权利要求1所述的布氏锥虫亮氨酰tRNA合成酶活性的检测方法，其特征是，步骤三中，所述洗涤具体为：先将滤纸片在三氯乙酸溶液中静置5-15分钟，然后摇晃洗涤1-5分钟，完成一次洗涤过程；重复该过程三次，每次均更换三氯乙酸溶液。

5、根据权利要求4所述的布氏锥虫亮氨酰tRNA合成酶活性的检测方法，其特征是，步骤三中，所述三氯乙酸溶液，其组分及质量百分数为：三氯乙酸5％-20％，余量为水。

6、根据权利要求1所述的布氏锥虫亮氨酰tRNA合成酶活性的检测方法，其特征是，步骤四中，所述漂洗具体为：先将滤纸片放在酒精中静置5-15分钟，然后摇晃洗涤1-5分钟，完成一次漂洗过程；重复该过程三次，每次均更换酒精。

7、根据权利要求6所述的布氏锥虫亮氨酰tRNA合成酶活性的检测方法，其特征是，步骤四中，所述漂洗中酒精的体积分数为80％-100％。

8、根据权利要求1所述的布氏锥虫亮氨酰tRNA合成酶活性的检测方法，其特征是，步骤五中，所述烘干具体为：在80W-150W红外灯下烘干10-30分钟。