[发明专利]一种以固体秸秆为碳源培养发酵种子液的方法

权利要求书

1.一种以固体秸秆为碳源培养发酵种子液的方法，其特征在于，其具体步骤为：

(1)发酵菌种的活化：

从菌种保藏平板、保藏斜面或冷冻甘油保藏管保存的菌种接种于合成培养基，培养温度25～45℃；转速50～500rpm；培养12～36小时，OD₆₀₀值达到4～16；

在合成培养基中，葡萄糖浓度10～100g/L，营养盐浓度是KH₂PO₄或K₂HPO₄ 0.5～10g/l，MgSO₄·7H₂O 0.1～5g/l，(NH₄)₂SO₄ 0.5～10g/l，酵母萃取粉或玉米浆0.1～10g/l；

所述的菌种为酿酒酵母、管囊酵母、树干毕赤酵母或者运动发酵单胞菌菌株；

OD₆₀₀值是指含有菌体的溶液在600nm波长处的吸光值；

(2)培养基中添加固体秸秆进行同步糖化驯化培养种子：

活化的种子液的体积百分数为5～20％接种于固体秸秆的混合培养基中，在混合培养基中固体秸秆的质量百分数为3～30％，加入纤维素酶和营养盐，转速50～500rpm，温度25～45℃，培养12～36小时，得到发酵菌种的浆液；

混合培养基是指以0.1～50g/L葡萄糖溶液调整固体秸秆固含量的培养基，其pH为2.0～8.0；

所述的纤维素酶的加酶量为1～30FPU/g DM，FPU指纤维素酶液中的纤维素酶滤纸酶活，DM是指秸秆类物质干重；其中，纤维素酶液为商品化纤维素酶液；调整pH的溶液选自硫酸、氢氧化钙溶液、氢氧化钠溶液或者氨水中的一种或者两种以上混合溶液；

所述的营养盐为KH₂PO₄或K₂HPO₄ 0.5～10g/L，MgSO₄·7H₂O 0.1～ 5g/L，(NH₄)₂SO₄ 0.5～10g/l，酵母萃取粉或玉米浆0.1～10g/L；

所述的固体秸秆选自固体秸秆原料或者固体秸秆处理物；

(3)种子液的多级扩大培养过程：

将步骤(2)获得的种子液接种于含固体秸秆的培养基，在培养基中固体秸秆的质量百分数为3～30％，加入纤维素酶和营养盐，在摇瓶或种子罐中扩大培养种子，培养转速100～500rpm，温度25～45℃，培养12～36小时，获得种子培养液；种子液多级培养过程中培养级数涵盖1级到6级，各培养级间接种量的体积百分比为5～20％，接种于发酵罐的种子液包括从1级到6级培养种子获得的任一级的培养液，得到含发酵菌种的浆液。

2.如权利要求1所述的一种以固体秸秆为碳源培养发酵种子液的方法，其特征在于，在所述的步骤(1)中，菌种接种于合成培养基，培养温度为30℃，转速为150rpm。

3.如权利要求1所述的一种以固体秸秆为碳源培养发酵种子液的方法，其特征在于，在所述的步骤(1)中，所述的菌种为酿酒酵母。

4.如权利要求1所述的一种以固体秸秆为碳源培养发酵种子液的方法其特征在于，在所述的步骤(2)中，转速为150rpm，温度为37℃，培养为18小时。

5.如权利要求1所述的一种以固体秸秆为碳源培养发酵种子液的方法，其特征在于，在所述的步骤(2)中，混合培养基的pH为5.0。

6.如权利要求1所述的一种以固体秸秆为碳源培养发酵种子液的方法，其特征在于，在所述的步骤(2)中，所述的固体秸秆原料选自玉米秸秆、麦秸、稻草中的一种。

7.如权利要求6所述的一种以固体秸秆为碳源培养发酵种子液的方法， 其特征在于，所述的固体秸秆原料选自玉米秸秆。

8.如权利要求1所述的一种以固体秸秆为碳源培养发酵种子液的方法，其特征在于，在所述的步骤(2)中，所述的固体秸秆处理物选自采用稀酸、蒸汽爆破、氨气爆破、生物法预处理后的玉米秸秆、麦秸、稻草中的一种。

9.如权利要求8所述的一种以固体秸秆为碳源培养发酵种子液的方法，其特征在于，所述的固体秸秆处理物选自蒸汽汽爆预处理的玉米秸秆。