[发明专利]5’-脱氧核苷单磷酸的制备方法

说明书

技术领域

本发明涉及化学合成领域，特别涉及化学合成5′-脱氧核苷单磷酸的制备工艺。

背景技术

基于脱氧核苷和脱氧核苷酸及其衍生物的药物是一类新兴的生化药物，近年来在生物医药领域的研究及应用发展迅猛，有研究表明基于此类的生物制药将在未来人类抗肿瘤等方面发挥重要作用。目前在抗癌、抗病毒、抗真菌、抗细菌、治疗心肌梗塞、作为干扰素诱导剂及基因治疗等方面的研究正在不断深入，疗效亦很明显，并在临床上得到广泛应用(例如抗癌药5-FdUR、治疗艾滋病的扎西他宾等)，随着此类药物研究的不断深入，除使用天然脱氧核苷、脱氧核苷酸作为原料外，更大量使用新设计的化合物、经化学修饰的脱氧核苷和脱氧核苷酸为原料。因此5′-脱氧核苷酸作为基础原料，将具有非常广阔的前景。目前常用的制备方法大致有以下几种：

1.微生物发酵法：主要利用微生物菌株的生物合成途径来制备5′-脱氧核苷酸。对于核苷类物质，比较容易透过微生物细胞，因此利用此法生产核苷比较容易。但核苷酸类物质极性较大，较难透过细胞膜，因此增加了菌体发酵制备脱氧核苷酸的难度。目前仅适用于制备部分脱氧核苷酸，国外也有相关的专利公告。但菌种的选择及菌株的培养有较高的技术壁垒，且不适用于规模化大生产，成本高昂。

2.酶解法：是历史悠久、技术最成熟的制备方法。以DNA为底物酶解得到。利用桔青酶发酵得到的核酸P1酶或从麦芽根中提取出的磷酸二酯酶进行酶解反应，得到四种混合的脱氧核苷酸，再通过离子交换树脂分离纯化得到四种脱氧核苷酸的纯品。在酶解过程中，鉴于酶作用的专一性，能高效率地生产出特定的脱氧核苷酸。与此同时正因为它的专一性，它的应用面也受到很大的限制，而且相对的生产成本较高、生产周期较长。

酶催化法：即酶催化核苷磷酸化法。以相应的脱氧核苷为底物，利用各种激酶即磷酸转移酶、核糖磷酸转移酶、5′-核酸酶、酸性转移酶等进行酶催化反应得到。目前国外也有相关的专利公告。

目前使用的获得5′-脱氧核苷单磷酸的方法复杂、专一性强、生产成本高昂、消耗大。

因此，本领域迫切需要提供一种简便、适用性强的化学合成5′-脱氧核苷单磷酸的方法。

发明内容

本发明涉及一种5′-脱氧核苷单磷酸的制备方法。

在本发明中，提供了一种5′-脱氧核苷单磷酸的制备方法，所述的方法包括以下步骤：

(1)将2′-脱氧核苷、三氯氧磷和磷酸三烷基酯混合，得到含有5′-脱氧核苷酸粗品的溶液；

(2)使步骤(1)得到的含有5′-脱氧核苷酸粗品的溶液在pH≥8.0进行水解，得到水解液；

(3)将有机溶剂和步骤(2)的水解液混合、萃取，得到有机相和水相；所述的有机溶剂是卤代烃；

(4)浓缩水相得到浓缩液；和

(5)步骤(4)得到的浓缩液在10至15℃得到固体5′-脱氧核苷单磷酸。

在另一优选例中，步骤(1)中2′-脱氧核苷、三氯氧磷和磷酸三烷基酯的混合比例为：2′-脱氧核苷∶磷酸三烷基酯＝1∶20-30(w/v)、2′-脱氧核苷∶三氯氧磷＝1∶1-3(w/v)。

在另一优选例中，步骤(1)中的混合温度为零下20至0℃。

在另一优选例中，步骤(2)中的水解温度为零下20至零下5℃。

在另一优选例中，步骤(2)中水解在pH8-10进行。

在另一优选例中，步骤(3)中所述的卤代烃选自C1-C4的卤代烷烃；较佳地，为C1-C4的氯取代烷烃；更佳地，为C1-C4的一氯取代烷烃、或C1-C4的二氯取代烷烃。

在另一优选例中，步骤(3)中有机相中磷酸三烷基酯含量10％以下。

在另一优选例中，步骤(4)得到的浓缩液中固体物含量3-15w/v％(即3- 15g核苷酸/100mL(溶液体积)。

在另一优选例中，步骤(5)中使步骤(4)得到的浓缩液pH2-5.5。

在另一优选例中，将步骤(5)得到的固体5′-脱氧核苷单磷酸和水混合，重复步骤(4)至步骤(5)1、2、3、4、5、或6次。

据此，本发明提供了一种简便、适用性强的化学合成5′-脱氧核苷单磷酸的方法。

具体实施方式

发明人经过深入的研究，惊奇地发现，2′-脱氧核苷上磷后，经过一系列简便的纯化步骤，可以得到纯度非常高的5′-脱氧核苷单磷酸。