[发明专利]β-葡萄糖基-Yariv试剂的制备方法

说明书

技术领域

本发明属于医药中间体、生物诊断试剂和蛋白染色试剂制备领域，涉及一种 β-葡萄糖基-Yariv试剂[即1，3，5-三(4-β-D-葡吡喃糖氧基-氧化苯基偶氮基)-2， 4，6-三羟基苯]的合成方法。

背景技术

β-葡萄糖基-Yariv试剂(β-D-glucosyl-Yariv reagent，βGlcY)，即：1，3，5-三 (4-β-D-葡吡喃糖氧基-氧化苯基偶氮基)-2，4，6-三羟基苯，是一种人工合成的苯 基偶氮染色剂，其结构式如下：

该试剂可与阿拉伯半乳糖蛋白(AGPs)的糖基发生反应形成红色沉淀。这 对于我们探究植物体中AGPs的分布和生理作用有着十分重要的意义。但如今， 这种试剂的合成技术在国内外研究很不成熟，可以说已经出现了一个技术缺口， 而国内这项技术目前尚未见研究报道。

在国外，最早是J.Yariv等人在1962年发表的文章(Yariv，J.；Rapport，M.M.； Graf，L.The interaction of glycosides and saccharides with antibody to the corresponding phenyl azo glycoside.Biochem.J.1962，85，383-388.)中提出了 -D-葡萄糖苷Yariv试剂的合成方法。之后也仅在I.Ganjian等人的文章(Ganjian， I.；Basile，D.V.Reductive syntheses of p-aminophenyl-β-D-glucoside and its conversion toβ-glucosyl Yariv reagent.Anal.Biochem.1997，246，152-155.)中 对其合成进行了改进，即从对硝基苯基葡萄糖苷作为起始原料进行合成。但这些 方法在合成中都存在操作繁琐、产率较低等问题，总产率为一般在20～40％左右。

合成上的困难严重约束了此试剂的更广泛应用和发展。正在这种背景下，需 要找寻一种合成β-葡萄糖基-Yariv试剂的较为简捷、经济和高效的合成方法。

发明内容

本发明旨在提供一种β-葡萄糖基-Yariv试剂[即：1，3，5-三(4-β-D-葡吡喃 糖氧基-氧化苯基偶氮基)-2，4，6-三羟基苯]的合成方法，提高产率，而且方法 简捷，使其制备具有工业生产价值。

技术方案为：

(1)对硝基苯基葡萄糖苷还原制备对氨基苯基葡萄糖苷：

将硝基苯基葡萄糖苷与溶剂混合搅拌，加入钯催化剂和甲酸铵，40～60℃条 件下反应，反应结束后过滤，取滤液减压浓缩；其中Pd与硝基苯基葡萄糖苷的 摩尔比为(0.02～0.5)∶1，硝基苯基葡萄糖苷与甲酸铵的摩尔比为1∶(2～10)； 所述的溶剂选自甲醇或乙醇。

硝基苯基葡萄糖苷与溶剂的质量体积比为0.05～0.02g/ml。

钯催化剂中，钯的重量百分含量为5％～15％，可选用Pd/C。

Pd与硝基苯基葡萄糖苷的摩尔比优选为(0.02～0.2)∶1。

硝基苯基葡萄糖苷与甲酸铵的摩尔比优选为1∶(3～6)。

(2)重氮化反应：

取步骤(1)得到的固体溶于水中，去除低沸点杂质后，将温度控制在0～5℃， 加入HCl溶液，再滴加亚硝酸盐溶液；硝基苯基葡萄糖苷与HCl的摩尔比为1∶ (1～5)，硝基苯基葡萄糖苷与亚硝酸盐的摩尔比为1∶(1～5)，得到重氮盐溶液。

HCl溶液浓度为0.3～1.0M。

亚硝酸盐选自亚硝酸钠或亚硝酸钾。硝基苯基葡萄糖苷与亚硝酸盐的摩尔比 优选为1∶(1～2)。

去除低沸点杂质的方法为：将pH调节至2～3，在1～20mmHg、20～35℃ 下减压蒸馏，去除反应系统中1/3～1/2体积水分；加入原反应系统1/3～1/2体 积的水，调节pH至2～3，在20～35℃下减压蒸馏，去除反应体系中1/3～1/2 体积水分；再加入水至原反应系统体积。

(3)偶联反应：