[发明专利]沼湿草的组织培养方法

权利要求书

1.沼湿草的组织培养方法，其特征在于，该方法包括以下步骤：

(1)无菌材料的获得

在春季取萌发的沼湿草的小芽，除去叶片，用自来水冲洗1-3h，再于超净工作台上，依次利用质量浓度为70-75％的乙醇浸泡10-50s，体积浓度为0.5-2‰的汞浸泡10-30min，再用无菌水冲洗4-6次，利用无菌滤纸吸干小球茎表面的水分后，将小球茎切成0.5-2cm的带腋芽的节段，节段接种于腋芽诱导培养基上；

(2)芽的分化和增殖

节段接种于腋芽诱导培养基上1-3周后，腋芽部位开始膨大，出现绿色突起，3-4周后节段上可以看见芽分生组织，再培养1-2个月，芽可以长到3-4cm长，将不定芽切下移入不定芽增殖培养基中进行增殖培养，不定芽基部的愈伤组织较多，但不定芽仍增殖较快，生长发育良好，并无玻璃化等不良现象；

(3)不定芽壮苗培养

在不定芽增殖培养基里诱导出的不定芽处于矮化状态，将不定芽分成小丛，然后将分成小丛的不定芽转至壮苗培养基上，不定芽迅速伸长，20-30天后可以长到3-4cm；

(4)生根培养

取3-4cm的不定芽小植株，转接入生根培养基中诱导生根，8-15天后小植株幼苗的基部分化出白色的根原基，25-35天后可以长至4-6cm，根系粗壮，须根众多，生根率为90-100％；

(5)炼苗与移栽

在生根培养15-25天，根系长至0.5-2cm时，选择根系发达、生长健壮的无菌幼苗，于室内开瓶炼苗1-3天，然后将苗取出，洗净其根部的琼脂，栽于温室内的苗床中驯化25-40天，即可移栽室外，并给予肥水管理，移栽成活率为90-100％。

2.根据权利要求1所述的沼湿草的组织培养方法，其特征在于，所述的腋芽诱导培养基包括MS+6-BA1.0-3.0mg/L+NAA0.05-0.2mg/L。

3.根据权利要求1所述的沼湿草的组织培养方法，其特征在于，所述的不定芽增殖培养基包括MS+6-BA0.5-2.0mg/L+NAA0.05-0.2mg/L。

4.根据权利要求3所述的沼湿草的组织培养方法，其特征在于，所述的不定芽增殖培养基优选MS+6-BA2.0mg/L+NAA0.2mg/L。

5.根据权利要求1所述的沼湿草的组织培养方法，其特征在于，所述的壮苗培养基包括MS+6-BA0.05-2.0mg/L+NAA0.1-0.2mg/L。

6.根据权利要求5所述的沼湿草的组织培养方法，其特征在于，所述的壮苗培养基优选MS+6-BA1.0mg/L+NAA0.1mg/L。

7.根据权利要求1所述的沼湿草的组织培养方法，其特征在于，所述的生根培养基包括MS+NAA0.1-0.3mg/L。

8.根据权利要求7所述的沼湿草的组织培养方法，其特征在于，所述的生根培养基优选MS+NAA0.1mg/L。

9.根据权利要求2或3或5或7所述的沼湿草的组织培养方法，其特征在于，所述的培养基还包括蔗糖20-40g/L、琼脂粉4-8g/L，培养基pH5.5-6.0，培养温度24-26℃，光照1500-2500lx。