[发明专利]早期预测慢性乙肝发展成肝硬化的hsa-mir-122试剂盒及检测方法

说明书

技术领域

本发明涉及医学生物检测技术领域，是一种用于检测血浆或血清中的hsa-mir-122的含量，来早期预测慢性乙肝发展成肝硬化的试剂盒，及其检测方法。

背景技术

慢性乙型肝炎是由乙型肝炎病毒(HBV)感染引起的一种慢性传染性疾病，易发展为肝硬化、肝癌。全球大约有20亿人曾经感染过乙型肝炎病毒，目前大约有3.5亿慢性乙型肝炎病毒携带者，而且70％都在我们亚洲地区。

肝硬化是一种以肝组织弥漫性纤维化，假小叶和再生结节形成为特征的慢性疾病，是慢性乙型肝炎的一个严重结局，如能阻断、减轻乃至逆转慢性乙型肝炎的进一步发展，就能在很大程度上改善肝病的预后。早期肝硬化系指临床上无任何特异性症状或体征，肝功能检查无明显异常，但在肝脏组织学上已有明显的病理变化。由于早期肝硬化在临床上无任何特异性的症状和体征，故处于亚临床的病理变化阶段，当患者出现明显症状时，大多数病情已经进展到了严重程度，给患者带来精神和经济上的沉重负担。因此，早期预测肝硬化的发生发展，对指导临床实践有重要意义。

目前还没有可靠的实验室或影像学方法对慢性肝炎发展成肝硬化进行早期预测。尽管肝脏活检、进行组织病理学检查仍是诊断肝硬化的“金标准”，但只能在肝硬化发生以后对其进行确诊，而且还存在技术上的限制和危险，如肝脏病变的不均匀性而导致的取样误差。由于存在一定的损伤性，患者难以接受反复取材，故而不能动态观察肝纤维化及肝纤维化形成的情况。因此，寻找令人满意的预测肝硬化发展的有效、非侵袭性的实验室指标是目前肝病临床研究的一个热点。

microRNA(miRNA)是一类长度约21～25碱基的非编码蛋白质单链小分子RNA，广泛存在于多细胞生物和病毒体内，主要通过核酸序列互补匹配结合到特定的靶mRNA上，抑制靶mRNA翻译过程或降解靶mRNA，是一种起负调控作用的分子。目前越来越多的研究显示，miRNA广泛参与了生物体多种生理过程，且相关研究报道也表明其表达及功能失调可能导致肿瘤发生、白血病以及病毒感染等多种病理现象。

对于miRNA能否作为一种实验室无创性检测手段，目前更多的研究集中在对于癌症早期诊断方面。这一新兴研究领域仅仅在测定血清标志物上开始得到应用。已有实验证实，miRNA在血浆和血清中非常稳定，它们被有效保护以免接触RNases，在严酷环境条件下仍能保持稳定。因此，它们的稳定性使得其实际值与在病人身上得到的测试值吻合得很好。

目前，对于miRNA的早期预测功能主要集中在肿瘤方面，比如：CharlesH.Lawrie等人证实：弥漫性B细胞淋巴瘤病人的血清hsa-mir-21水平很高，后者与不复发存活率密切相关(参见文献Lawrie CH，Gal S，Dunlop HM，et al.Detection of elevated levels of tumourassociated microRNAs in serum of patientswith diffuse large B-cell lymphoma.Br J Haematol 2008；141：672-675)。ChenX等人在细胞研究杂志上的报道对肺癌、结肠癌和糖尿病的患者血清miRNAs水平进行了分析，确定这些疾病都有其特异性的血清miRNA表型(参见文献Chen X，Ba Y，MaL，et al.Characterization of miRNAs in serum：a novel class ofbiomarkers for diagnosis of cancer and other diseases.Cell Res2008；18：997-1006)。