[发明专利]果汁中耐热菌的快速检测方法

说明书

技术领域

本发明涉及食品卫生检测技术领域，具体地说是一种果汁中耐热菌的快速检测方法。

背景技术

耐热菌，即酸土环脂芽抱杆菌(Alicyclobacillus acidoterrestris)，是1994年从腐败的苹果汁中发现的，它是一种嗜酸、嗜热的芽孢杆菌，能经受酸性条件(pH3.5)和巴氏灭菌而存活，是果汁生产中重要的目标控制微生物，它在果汁中大量繁殖，不产生气体，不改变果汁的外观，但会代谢产生以愈创木酚为主的化学物质，释放类似臭袜子的特殊的化学药品气味，有时会使果汁轻微沉淀或出现雾状浑浊，对果汁感官品质产生重大影响，完全破坏了果汁的食用性和商品价值。随着人们对食品安全问题的日益重视，国际贸易中对果汁的耐热菌含量要求很高，耐热菌的有效控制，首先需要有快速而准确的检测方法。

目前常用的耐热菌检测方法有常规的培养检测法、分子生物学的DNA分析或16SrRNA序列分析方法。由于耐热菌生长缓慢，常规的培养检测法需要4～5日才能出检测报告，分析结果的滞后使之无法及时指导生产。分子生物学的DNA分析或16SrRNA序列分析的方法虽然检测的时间较短，但检测成本较高，检测步骤复杂，一般小型果汁厂家不会采用这种分子生物学的分析方法对日常生产进行质量控制。

发明内容

本发明的目的是针对现有技术的不足而提供的一种果汁中耐热菌的快速检测方法，分析工艺简单，操作方便，它能快速、直观的检测果汁饮料中的耐热菌，检测费用低，对日常生产能有效、及时的进行质量控制，是一种很有应用前景的食品卫生检测方法。

实现本发明目的的具体技术方案是：一种果汁中耐热菌的快速检测方法，特点是该方法在果汁中接种耐热菌(BAM)培养基，使检测样品大量繁殖并迅速产生愈创木酚，利用愈创木酚在含有过氧化物酶的缓冲体系中与过氧化氢的反应，快速检测果汁中的耐热菌，具体检测按下述步骤进行：

a、将检测的果汁加热，加热温度为80℃，时间为10min，然后加入含香草酸浓度为100ppm的耐热菌(BAM)培养基为培养液，培养液在45℃温度下，静止培养24h，加滴的耐热菌(BAM)培养基与果汁的体积比为3∶1。

b、在上述培养液中加入浓度为50ppm的邻苯二甲酸氢钾溶液、3％的过氧化氢溶液和20U/ml的过氧化物酶溶液混合均匀后，在室温下反应10min，培养液与邻苯二甲酸氢钾溶液、过氧化氢溶液和过氧化物酶溶液的体积比分别为2∶1、20∶1和20∶3。

c、用分光光度计测定或用肉眼观察上述反应的颜色变化，分光光度计测定OD470≥0.5或肉眼观察上述反应出现红褐色，则表示检测的果汁中含有耐热菌；分光光度计测定OD470＜0.5或肉眼观察上述反应未出现红褐色，则表示检测的果汁中不含有耐热菌。

所述耐热菌(BAM)培养基由培养基A液和培养基B液按体积比为1000∶1配制而成，培养基A液和培养基B液为下述组分混合而成，所述物质按重量百分比计：

A液：

CaCl₂.2H2O：    0.20～0.30g    MgSO_4.7H₂O：   0.45～0.55g

(NH₄)₂SO₄：     0.15～0.25g    酵母粉：       1.50～2.50g

葡萄糖：        4.50～5.50g     KH₂PO₄：        2.50～3.50g

蒸馏水：        1000mL

B液：

CaCl.2H₂O：     0.56～0.76mg    MnSO₄.4H₂O：    0.10～0.20mg

NaMoO₄.2H₂O：   0.25～0.35mg    ZnSO₄.7H2O：    0.10～0.30mg

CoCl₂.6H₂O：    0.10～0.30mg    CuSO₄.5H₂O：    0.10～0.30mg

H₃BO₃：         0.05～0.15mg    蒸馏水：        1.00mL