[发明专利]将单分子DNA连接到单个磁珠上的方法

权利要求书

1.一种将单分子DNA连接到单个磁珠上的方法，其特征在于，包括如下步骤：

步骤一，将DNA荧光标记，之后进行如下操作：在DNA的3’端标记生物素，5’端标记地高辛；或者在DNA的3’端标记地高辛，5’端标记生物素；

步骤二，将DNA置于表面用抗地高辛被覆的玻璃上进行免疫反应，流水洗涤；或将DNA置于表面用抗链霉生物素被覆的玻璃上进行免疫反应，流水洗涤；

步骤三，如果步骤二是地高辛-抗地高辛免疫反应，则将抗链霉生物素被覆的磁珠添加到玻璃表面，进行第二次免疫反应；如果步骤二是生物素-抗链霉生物素免疫反应，则将抗地高辛被覆的磁珠添加到玻璃表面，进行第二次免疫反应；

步骤四，将DNA内切酶加到磁珠周围，待DNA分子被降解后，用微枪尖逐一收集携带短片段DNA的磁珠，并将其置于磁铁上；

步骤五，利用DNA内切酶切割目的DNA，在连接酶作用下，将目的DNA片段与磁珠上的DNA片段连接。

2.根据权利要求1所述的将单分子DNA连接到单个磁珠上的方法，其特征是，步骤一中，所述荧光标记为双链DNA染料。

3.根据权利要求1或2所述的将单分子DNA连接到单个磁珠上的方法，其特征是，步骤一中，所述荧光标记为花青类染料、吲哚类染料、咪唑类染料或菲锭类染料。

4.根据权利要求3所述的将单分子DNA连接到单个磁珠上的方法，其特征是，步骤一中，所述荧光标记为YOYO-1、溴化乙锭、Hoechst 33342或7-AAD。

5.根据权利要求1所述的将单分子DNA连接到单个磁珠上的方法，其特征是，步骤三中，所述磁珠为微米磁珠或纳米磁珠。

6.根据权利要求1所述的将单分子DNA连接到单个磁珠上的方法，其特征是，步骤四中，在加入DNA内切酶前，利用磁棒旋转磁珠，去除连接≥2条DNA分子的磁珠。