[发明专利]乙型肝炎病毒分离株复制型质粒的构建方法

权利要求书

1.一种乙型肝炎病毒分离株复制型质粒的构建方法，包括(1)HBV全长基因组的抽提、PCR扩增和克隆构建；(2)重组过渡载体的构建；(3)重组过渡载体的酶切与去磷酸化；(4)复制型质粒的构建，其特征在于：

所述重组过渡载体由三个连接片段同时定向连接，两个插入的HBV片段之间形成两个反向的BspQI酶切位点，使用SOC培养基进行HBV全长基因组克隆和复制型质粒的菌落培养扩增。

2.根据权利要求1所述的一种乙型肝炎病毒分离株复制型质粒的构建方法，其特征在于：所述重组过渡载体包含HBV完整的EnhI、EnhII、复制和转录起始点。

3.根据权利要求1或2所述的一种乙型肝炎病毒分离株复制型质粒的构建方法，其特征在于：重组过渡载体去磷酸化后进行一次自身连接和转化。

4.根据权利要求1所述的一种乙型肝炎病毒分离株复制型质粒的构建方法，其特征在于：步骤(1)中PCR产物纯化后经末端加A，将全长基因组片段插入TOPOXLPCR载体。

5.根据权利要求1所述的一种乙型肝炎病毒分离株复制型质粒的构建方法，其特征在于：步骤(3)中重组过渡载体的酶切使用BspQI内切酶。