[发明专利]结合结核杆菌噬菌体尾部蛋白的抗体及其制备方法和应用

说明书

技术领域

本发明涉及一种抗体，尤其涉及一种结合结核杆菌噬菌体尾部蛋白的抗体；此外，本发明还涉及该结合结核杆菌噬菌体尾部蛋白的抗体的制备方法和应用。

背景技术

肺结核病是由结核杆菌引起的一种人畜共患的慢性传染病，是目前单一传染性细菌致人死亡的主要因素。近年来，随着艾滋病的流行、多种恶性肿瘤患者的增多以及多重抗药性菌株的出现，更是增加了结核菌感染症防治上的困难。统计数据显示，全世界有结核病菌感染者20亿(占总人口1/3)，每秒钟感染一人，全球结核病菌每年新感染800万人，如果不立即采取防扩散措施，结核病将在今后10年内夺去3000多万人的生命。我国全国结核病感染者3.3亿，结核病人600万，每年因结核病死亡的病人高达25万，为各类传染病死亡总和的两倍，因此我国已将结核病由丙类传染病升为乙类传染病，列入严格管理范畴。据WHO统计，全世界每年有5千万至一亿人感染结核，约三百万人死于结核病，其中80％以上在发展中国家。因此，如何快速尽早地诊断并治疗成为控制结核病扩散和传播的关键环节。

目前，肺结核的诊断除了一般胸部X光检查外，主要是靠取痰液检查，包括抗酸杆菌痰涂片染色镜检与结核杆菌培养，结核杆菌的细菌学检查是确诊肺结核的重要依据。抗酸杆菌涂片检查敏感性低，特异性差，并且无法确定细菌死活。结核杆菌培养通常是将待检标本接种至改良的罗氏培养基，37℃培养20～60天，待细菌生长后再依据生物学特征及生化反应多项指标综合判断。由于结核菌的菌体结构复杂，富脂质，疏水性，使得肺结核杆菌生长速度缓慢，每隔十二～二十四小时才分裂一次。所以，利用培养方法来侦测结核菌的存在，往往需要三～八周的时间才可以得到结果，耗费时间长，而且操作繁琐，无法满足快速确诊肺结核的需要，经常延误治疗的时机且敏感性不高(阳性率不过40％左右)。

最近几年，噬菌体快速扩增法利用耻垢分枝杆菌的快速生长特性以及D29噬菌体的相对专一性，进行结核杆菌的快速检测。该方法的核心内容是：

a.用样品处理液室温处理待检样品30分钟，离心去上清；

b.用增菌液37℃增菌24小时；

c.加入D29分枝杆菌噬菌体37℃温育1小时，感染结核杆菌菌体；

d.用中止液灭活未侵入结核杆菌的噬菌体，室温作用10分钟以中止感染；

e.取步骤d所得的待测液，滴于耻垢分枝杆菌预包被的琼脂菌落培养皿上，37℃温育15-20小时；

f.根据菌落培养皿上噬菌斑的形成情况判定结果。

该方法的试剂盒特异性强、结果明晰，无需特殊仪器，可用于各种待检样品中活的结核杆菌菌体快速鉴定；但是整个测试至少需要48小时才能完成，而且操作较复杂，灵敏度也不够高。

近年来，随着分子生物学技术、抗原纯化技术及单克隆抗体技术的日益成熟，一些快速的检验方法相继问世，如：聚合酶链反应法(polymerase chain reaction，PCR)、酶联免疫吸附法(Enzyme linked immunosorbent assay，ELISA)、斑点免疫金渗滤法(dot immuno-gold filtration assay，DIGFA)及免疫层析法(immunochromatographic test，ICT)。

多聚酶链反应是由一对特定的寡核苷酸引物介导待检标本中结核杆菌DNA特定序列片段的体外酶促扩增技术，通过三个不同温度、数十个变性、复性、延伸的循环，特定靶序列可被扩增数百万倍，而显示其快速、高灵敏度、可定量分析以及理论上的高特异性等特点。不过该方法操作比较复杂，对操作设备和人员的技术要求较高，实验室易产生污染。

酶联免疫吸附法、斑点免疫金渗滤法和免疫层析法均是基于血清免疫学发展起来的检测方法。这些方法均是以结核杆菌的特征性抗原为捕获物，以标记的抗人免疫球蛋白或葡萄球菌蛋白A(Staphylococal Protein A，SPA)等为指示系统，检测患者体内存在的抗结核分枝杆菌的循环抗体，间接地对病人的患病情况进行诊断。酶标法需要专业的仪器及高操作技能的专业人员。免疫渗滤法及免疫层析法均不需要任何仪器，检测所需时间也大为缩短，操作简便，结果直观。但上述方法共同的问题是灵敏度以及特异性很难达到要求，并且不能区分曾经感染已经治愈的病例；有的产品甚至不能区分注射过卡介苗(Bacillus Calmette-Guerin，BCG)的病例。

发明内容

本发明要解决的技术问题之一是提供一种结合结核杆菌噬菌体尾部蛋白的抗体。