[发明专利]奶牛和杂交牛脊椎畸形综合征PCR-RFLP检测方法

权利要求书

1.一种检测牛隐性遗传疾病脊椎畸形综合征的组合物，其特征在于，包含下列试剂

1)正向引物：5’GCTCTCCTCTGTAATCCCCA 3’，

反向引物：5’CCACTGGAAAAACATGCTGTGAGTA 3’；

2)限制内切酶Rsa

3)10×酶切缓冲液

4)10×buffer

5)Tag酶

6)d NTP

7)双蒸水

其使用方法如下：

1)在一个反应总体积为25μL的PCR反应体系中的用量

正向引物5’GCTCTCCTCTGTAATCCCCA 3’      1μL；

反向引物5’CCACTGGAAAAACATGCTGTGAGTA 3’ 1μL；

Tag酶(2U/μl)                            0.5μL；

d NTP(10μM each)                        0.5μL；

模板DNA                                  1.5μL；

10×buffer                               2.5μL；

双蒸水                                   18μL；

2)PCR反应扩增程序：94℃变性3min，35次循环(94℃1min，65℃1min，72℃1min)，72℃延伸10min，得到PCR扩增产物；

3)取步骤2)的PCR扩增产物16μL，加入5URsaI限制内切酶和2μL 10×酶切缓冲液，加水至20μL，在37℃下反应5h。