[发明专利]类鼻疽检测试剂盒及检测方法

说明书

技术领域

本发明属于细菌抗原的检测技术领域，具体为一种类鼻疽假单胞菌(Burkholderia　pseudomallei)的检测鉴定试剂盒，同时还涉及对类鼻疽假单胞菌进行检测的方法。它既可以应用于医院对发热病人临床样品的定性检测，也可以应用于对类鼻疽疫原地进行大规模的流行病学调查。可广泛应用于医学和生物学研究领域。

背景技术

类鼻疽是由类鼻疽假单胞菌(Burkholderia pseudomallei)引起的一种新发现的感染性疾病；现在被认为是澳大利亚和东南亚一些国家的比较重要的公共卫生问题(Chen WT，Chen YS，Chye SM，et al.Seroprevalence of melioidosisin diabetic patients in Taiwan.J Microbiol Immunol Infect　2005；38(4)：267-70.)。类鼻疽的临床症状有肺炎、皮肤和软组织化脓、脑积水、肝和脾化脓以及脓血症，肺炎是其主要的临床症状，一半的类鼻疽病人都会有肺炎症状的发生，容易误诊为肺结核或者其他疾病。类鼻疽伯克霍尔德菌是一种革兰氏阴性短杆菌，是一种高致死率的环境病原菌，近年来我们发现病例致死率达50％以上，而且入院误诊率高达100％，类鼻疽病的及时诊断和治疗是降低病死率的最有效措施。

最近的流行病学调查表明，类鼻疽假单胞菌的疫原地主要分布于南北纬20度之间的广大赤道国家和地区(Raja NS，Ahmed MZ，Singh NN.Melioidosis：anemerging infectious disease.J Postgrad Med 2005；51(2)：140-5.)，包括我国的广东、广西、台湾和海南等省(Yang S.Melioidosis research in China.Acta Trop 2000；77(2)：157-65.)。类鼻疽假单胞菌主要生存在疫原地的稻田、橡胶园和水源地附近。虽然人们对类鼻疽假单胞菌的疫原地进行了广泛的调查，但是类鼻疽假单胞菌在全球的分布情况还是不清楚。

目前对类鼻疽假单胞菌疫原地的调查方法现在还是以分离、培养、鉴定的方法作为主要方法，是金标准。但是这种方法从土壤的采集到最终的细菌鉴定结果需要至少一个月的时间，而且需要大量的人力物力。这是不能对类鼻疽假单胞菌在地球上详细分布情况进行流行病学调查的主要原因。

目前类鼻疽的临床检验常用细菌分离培养法。主要是对患者的脓液和血液样品进行培养后分离鉴定。此方法虽有“金色指标”之称，但其技术复杂、费时长(通常需1周)，不适合用于早期诊断。免疫学方法虽能达到快速诊断目的，但其灵敏度和特异性变化较大，容易出现假阳性，且某些底物具有致癌作用，使临床应用受到一定限制。

ELISA法是免疫诊断中的一项新技术，现已成功地应用于多种病原微生物所引起的传染病、寄生虫病及非传染病等方面的免疫诊断。也已应用于大分子抗原和小分子抗原的定量测定，根据已经使用的结果，认为ELISA法具有灵敏、特异、简单、快速、稳定及易于自动化操作等特点。不仅适用于临床标本的检查，而且由于一天之内可以检查几百甚至上千份标本，因此，也适合于血清流行病学调查。本法不仅可以用来测定抗体，而且也可用于测定体液中的循环抗原，所以也是一种早期诊断的良好方法(Sermswan RW，Wongratanacheewin S，Anuntagool N，Sirisinha S.Comparison of the polymerase chain reaction and serologictests for diagnosis of septicemic melioidosis.Am J Trop Med Hyg 2000；63(3-4)：146-9.)。

发明内容

本发明的目的是在于提供了一种类鼻疽假单胞菌的检测试剂盒，通过直接检测临床样品培养物进行类鼻疽假单胞菌鉴定的ELISA试剂盒，能快速、灵敏、准确的检测到类鼻疽假单胞菌。

本发明的另一个目的是在于提供了一种直接检测土壤培养物中类鼻疽假单胞菌的抗原检测的方法，方法易行，操作简便，可以应用于大规模对类鼻疽疫原地的流行病学调查。

为了解决上述任务，本发明采取以下措施：