[发明专利]用寇氏隐甲藻工业化发酵生产二十二碳六烯酸的方法

说明书

技术领域

本发明涉及微生物发酵生产方法，具体涉及利用寇氏隐甲藻菌株发酵生产含二十 二碳六烯酸混合油脂。

背景技术

二十二碳六烯酸(cis-4，7，10，13，16，19-docosahexaenoic acid，简称DHA)是欧 米嘎3系列长链多不饱和脂肪酸，是大脑、视网膜的重要结构物质，还能够调节中枢 神经系统功能、预防和治疗心血管疾病、消除炎症、抑制癌症。

DHA的商业来源目前主要是鱼油和微藻。鱼油的产量和DHA含量都不稳定，提取物 夹杂鱼腥味，而且从鱼油中提取的含DHA混合油脂中还含有二十碳五烯酸(EPA)，据 研究，EPA对婴幼儿的发育具有不利的影响。目前的海洋渔业资源接近枯竭，从鱼油中 提取DHA造成极大的浪费。微澡的培养需要光照和二氧化碳，生产工艺繁杂，成本较 高。随着人口的增加，以及人们对健康的迫切需求，全世界对DHA的需求量相应增加， 需要寻求大量的DHA新来源，而且最好是此来源的DHA不含有EPA。

申请(专利)号：200710025079.3的专利公开了一种从隐甲藻中提取并精制DHA 的方法，侧重于从隐甲藻中提取并精制DHA，对隐甲藻的发酵制备DHA涉及较少，并且 其所公开的提取物中DHA含量为40-50％。

申请(专利)号：200610125476.3的专利公开了一种从寇氏隐甲藻中发酵提取DHA 的方法。其所公开的产量为海藻细胞中DHA含量在30％-50％，获得的海藻细胞为 20-40g/L，海藻细胞含油量为20-50％，其生产率不超过3.5克/升.天。

发明内容

本发明所要解决的问题是提供一种用寇氏隐甲藻(Crypthecodinium cohnii)原始 菌株为菌种，工业化发酵生产二十二碳六烯酸油脂的方法，该方法能够低成本、大量 生产高含量的甘油三酯型DHA油脂。

本发明提供的技术方案是：

用寇氏隐甲藻(Crypthecodinium cohnii)工业化发酵生产二十二碳六烯酸(DHA) 油脂的方法，包括以寇氏隐甲藻为菌种，采用包含碳源、氮源和无机盐的培养基，经 发酵制得二十二碳六烯酸油脂；所述氮源中含有缓效氮源豆粕粉水解汁。经发酵制得 DHA含量高于50％的油脂，其中二十碳五烯酸(EPA)含量在1％以下。

上述缓效氮源由下法得到：将豆粕粉溶解在水中，调节pH至9.0-10.0，并升温至 70-80℃，保温8-10h，过滤取清液得到缓效氮源；其中豆粕粉和水的用量重量比为 1∶3-1∶10；缓效氮源的用量为培养基总重量的4.0-8.0％。

上述培养基中还含有生长因子豆芽汁，生长因子的用量为培养基总重量的2.0- 4.0％；生长因子由下法得到：将黄豆芽洗净，沥干，用压榨机压榨取豆芽汁液得到生 长因子。

所述发酵用菌种为经斜面活化培养、然后转接入摇瓶扩大培养、再经一级扩大培 养得到的寇氏隐甲藻；或为经斜面活化培养、然后转接入摇瓶扩大培养、再经一级扩 大培养和二级扩大培养后得到的寇氏隐甲藻。

上述摇瓶扩大培养所用的培养基中含有苏木糖醇和精氨酸，苏木糖醇和精氨酸的 用量分别为培养基总重量的0.05-0.15％和0.05-0.15％。

本发明可在发酵培养48-60h时补充菌种，菌种的补入量为发酵液体积的8-10 ％。

本发明还可在发酵过程中，当发酵液的还原糖含量在2-3wt％时补充碳源。

本发明在发酵培养过程中可逐渐增加溶氧：初始通气量为0.5VVM，以后每次补充 碳源后提高通气量0.02VVM。通过溶氧递增的方式既增加溶氧，又稳定代谢平衡。

在发酵全过程中维持pH自然。

优选地，本发明在发酵进入稳定期(本发明所用菌种进入稳定期的时间为66-72h) 前控制温度为29-31℃，在进入稳定期后控制温度为22-24℃。

本发明利用寇氏隐甲藻发酵生产DHA的方法，其提取物中DHA含量为51-55％， 且其中的EPA含量不超过1％，DHA生产率可以达到4.6克/升.天，大大降低了DHA的 发酵成本。

本发明的技术指标均明显高于现有技术的技术指标，所制得的DHA质量更优，成 本更低，有利于大规模的工业化生产制造，并降低DHA的消费门槛，以利于DHA的推 广应用。

具体实施方式