[发明专利]一种检测呼肠孤病毒的荧光定量PCR试剂盒及应用

权利要求书

1.一种检测呼肠孤病毒的荧光定量PCR试剂盒，该试剂盒含有：a)RNA抽提液、b)逆转录反应液、c)逆转录酶、d)RNA酶抑制剂、e)引物和TaqMan探针、f)标准阳性DNA模板、g)荧光定量PCR反应液，其特征在于：引物序列分别为正义引物：5′-TGCGCCTATCCTTGAGTTGA-3′，反义引物：5′-TTGCCAGGAAATACGGGTCT-3′，扩增子大小为138bp，荧光探针序列为：5′-FAM-TCAAAATGGTGGACTTCAGTTTCGATTT-TAMRA-3′，探针的5’端标记荧光发射基团FAM，3’端标记荧光淬灭基团TAMRA，所述的标准阳性DNA模板的核苷酸序列为：

TGCGCCTATCCTTGAGTTGATAGAATCAAACACAGTCGTCTTGAGAGTCA

AGTTATTATTAACTATCTGGAATTAATCAGTATTAAATCGAAACTGAAGTC

CACCATTTTGAATATTCAGACCCGTATTTCCTGGCAA。

2.根据权利要求1所述的一种检测呼肠孤病毒的荧光定量PCR试剂盒，其特征是：所述的逆转录反应液是由5×buffer、10μmol/L的反义引物、逆转录酶、RNA酶抑制剂、10mM dNTPs和无RNA酶的灭菌双蒸水组成。

3.根据权利要求1所述的一种检测呼肠孤病毒的荧光定量PCR试剂盒，其特征在于：所述的荧光定量PCR反应液是由2×Premix、10μmol/L的正义引物和反义引物、10μmol/L荧光探针和无菌双蒸水组成。

4.根据权利要求1所述的一种检测呼肠孤病毒的荧光定量PCR试剂盒，其特征是：所述的标准阳性DNA模板由已插入呼肠孤病毒S1蛋白区361bp片段的pGEM-T载体转化大肠杆菌DH5α，增殖后提取质粒，并于紫外分光光度计测A₂₆₀定量并10倍梯度稀释。