[发明专利]一株重组毕赤酵母菌株及其筛选方法

说明书

技术领域

本发明涉及一种基因工程重组微生物及其筛选方法。

背景技术

随着经济的高速发展，人民生活水平的不断提高，高品质的生活越来越受到人们的关注， 这其中最重要的一条就是健康。但是经济的发展又伴随着人们饮食结构的改变，工作、生活 压力的增大，运动的减少和居住生活环境的恶化等等对健康不利的因素，各种疾病特别是恶 性疾病的发病率有逐年增高的趋势，其中肝癌是我国常见恶性肿瘤之一，死亡率高，在恶性 肿瘤死亡顺位中仅次于胃、食道而居第三位，在部份地区的农村中则占第二位，仅次于胃癌， 在我国每年死于肝癌约11万人，占全世界肝癌死亡人数的45％。为了预防和治疗这些恶性 疾病，全国每年花费大量的人力和物力，但收效甚微。

据统计，全球现在有1500万-2000万人酗酒，其中10％-20％的人有不同程度的酒精性 肝病。在我国，也有不少人嗜好饮酒。据报道，适量饮酒对大多数人的健康并没有损害，少 量饮用酒精性饮料，如葡萄酒，对身体还有一定的好处。但是，若长期过量饮酒，特别是饮 用高度酒，会使肝细胞反复发生脂肪变性、坏死和再生，最终导致肝硬化、肝癌。

另外，根据报道乙醛脱氢酶的补充可以减少心肌缺血/再灌注损伤，减少心肌细胞由于缺 氧而引起的凋亡等。许多文献已经表明乙醛脱氢酶的存在对心肌细胞都有良好的保护作用。

基于以上原因，社会迫切的需要一种行之有效的解酒、保肝的保健品出现。今年来出现 一些含乙醛脱氢酶的解酒药的报道，但是乙醛脱氢酶至今获得途径的狭窄，成为该类保健品 的瓶颈。

发明内容

本发明的目的在于提供一株重组毕赤酵母菌株及其筛选方法。

本发明所提供的一株重组毕赤酵母菌株，为一株巴斯德毕赤酵母(Pichia pastoris) GS115-07ALDH2菌株，已于2009年1月6日保藏于中国典型培养物保藏中心(简称CCTCC)， 保藏号：CCTCC NO：M208266。

本发明所采用的巴斯德毕赤酵母(Pichia pastoris)GS115为华中农业大学生命科学技 术学院赠送。

一株重组毕赤酵母菌株的筛选方法，其特征在于：

一).质粒pPIC9K-ALDH2的获得及其验证

1).目的序列设计与合成：

由Genebank上人ALDH2DNA(gene ID217)序列，删除UTR和信号肽并加上内切酶 EcoR I和内切酶Not I酶切位点，再根据毕赤酵母密码子用法修改了28个碱基得到目的序列 ALDH2；具体序列如下：

CGGAATTCTCAGCCGCCGCCACCCAGGCCGTGCCTGCCCCCAACCAGCAGCCCGAGGTCT  60

TCTGCAACCAGATTTTCATAAACAATGAATGGCACGATGCCGTCAGCAGAAAAACATTCC  120

CCACCGTCAATCCGTCCACTGGAGAGGTCATCTGTCAGGTAGCTGAAGGGGACAAGGAAG  180

ATGTGGACAAGGCAGTGAAGGCCGCCAGAGCCGCCTTCCAGCTGGGCTCACCTTGGAGAC  240

GTATGGACGCATCACACAGAGGCCGACTGCTGAACAGACTGGCCGATCTGATCGAGAGGG  300

ACAGAACCTACCTGGCTGCCTTGGAGACCCTGGACAATGGCAAGCCCTATGTCATCTCCT  360

ACCTGGTGGATTTGGACATGGTCCTCAAATGTCTCAGATATTATGCCGGCTGGGCTGATA  420

AGTACCACGGGAAAACCATCCCCATTGACGGAGACTTCTTCAGCTACACAAGGCATGAAC  480

CTGTGGGGGTGTGCGGGCAGATCATTCCGTGGAATTTCCCGCTCCTGATGCAAGCATGGA  540

AGCTGGGCCCAGCCTTGGCAACTGGAAACGTGGTTGTGATGAAGGTAGCTGAGCAGACAC  600