[发明专利]当归补血口服液中黄芪甲苷含量的测定方法

说明书

技术领域

本发明涉及中药制剂中有效成份的测定方法，尤其是涉及一种当归补 血口服液中黄芪甲苷的测定方法。

背景技术

当归补血口服液是由郑州市协和制药厂生产的成方制剂，为国内首创 的治疗性补气、补血四类新药，经国家中药保护委员会批准为国家中药保护 品种，全国独家生产。该口服液补气养血，适用于气血两虚症。用于营养不 良、脾胃虚弱引起的贫血症及妇科疾病引起的贫血症；同时还具有美容驻颜 之功效。由于当归补血口服液为液体制剂，药物吸收快，作用迅速，服用 方便。

当归补血口服液中黄芪为主药，且用量最大，起主要作用，黄芪是传统 中药，为补气药，性甘温，归肺脾经，具有补气固表，利尿托毒，排脓，敛 疮生肌之功效。现代研究表明黄芪含有多种化学成分，如皂苷类，黄酮类， 木脂素类，氨基酸类，多糖类及多种微量元素等。其所含的三萜皂苷类化 合物-黄芪甲苷，是黄芪的主要的有效成分，也是当归补血口服液的主要有 效成分。因此，作为当归补血口服液的质量标准评价手段，，黄芪甲苷含量 测定的准确与是保证产品疗效的技术关键。

常规测定制剂中黄芪甲苷含量的方法主要有两种方法：高效液相色谱- 紫外检测法和薄层色谱扫描法。高效液相-紫外检测法测定黄芪甲苷含量， 系统平衡慢(1-2小时)，基线不稳定，再加上黄芪甲苷无共轭体系，仅在 200nm左右有弱的紫外末端吸收，则色谱峰的响应值较底；又紫外末端吸 收易受影响，尤其是受溶剂吸收的干扰大，噪音对结果的影响也较大，噪音 大时，检测限也较大，那么低于此检测限的组分峰将被噪音所淹没，而监 测不出来。由此可知，当样品中黄芪甲苷含量较低时，此法很难准确测定。 为此，对黄芪甲苷的含量测定一般采用薄层色谱扫描法。但薄层色谱扫描 法操作较繁琐，且受影响因素较多，如薄层层析时，展开温度，展开系统 的饱和性，所用硅胶板颗粒的大小，硅胶板的紧密性等都会影响黄芪甲苷 的含量测定，虽然用了共薄层的方法消除了部分误差，但各次实验间的重 现性较差；为了排除其它成分的干扰和背景的干扰，须经过多步分离纯化， 而且在纯化过程中黄芪甲苷的损失也较多。

近年来，有用蒸发光散射检测器测定黄芪甲苷含量的报道，蒸发光散射 检测器是一种通用的质量型监测器，能检测到半挥发或不挥发性分子中无 紫外吸收的化合物；所得到的色谱图基线平稳，峰形良好，可达到基线分 离；灵敏度、稳定性及重现性亦能符合含量测定的要求，且操作简便，是 一种检测黄芪甲苷成分的新型有效的分析方法。与高效液相-紫外检测法相 比，高效液相-蒸发光散射检法主要用于测定无紫外吸收的化合物，因其在 测定有紫外吸收的组分时，灵敏度比紫外检测器要低。

当归补血口服液原质量标准采用薄层色谱扫描法，实验过程中发现， 薄层色谱扫描法受外部环境干扰较大，实验结果重现形较差，且分离纯化 复杂。由于当归补血口服液的中黄芪甲苷已存在于液体样品，对其进行测 定不同于生药及其制剂，按常规方法直接改用高效液相-蒸发光散射检测 法，样品经过正丁醇提取-氨试液洗涤，进样，结果表明色谱杂质峰较多， 峰形不对称，分离的重现性较差。

发明内容

本发明的目的在于提供一种用高效液相-蒸发光散射检测器准确检测当 归补血口服液中黄芪甲苷含量的测定方法。

为实现上述目的，本发明可采取下述技术方案：

本发明所述的当归补血口服液中黄芪甲苷含量的测定方法，其具体步骤 为：

(一)确定色谱条件：以十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂；以乙腈-水 36∶64为流动相；柱温：室温；流速：1.0mL/min。蒸发光散射检测器条 件：漂移管温度：35℃～45℃，载气流速2.7L/min，载气压力3.1Bar；

(二)对照品溶液的制备：称取黄芪甲苷对照品适量，加甲醇制成每 1ml溶液中含黄芪甲苷0。4mg的溶液备用；

(三)供试品溶液的制备：量取待测品10ml，置分液漏斗中，加水饱 和正丁醇提取4次，每次振摇200～250次，正丁醇用量每次20ml，合 并四次正丁醇提取液；用氨试液将上述所得的正丁醇提取液洗涤两次， 每次取氨试液20ml，第一次氨试液洗涤待完全分层后，弃去氨液；第二 次氨试液洗涤时需静置2～4小时，再弃去氨液；取所得正丁醇提取液， 蒸干，残渣加甲醇溶解并转移至5ml量瓶中，加甲醇至刻度，摇匀，即 得供试品溶液；