[发明专利]替米考星脂质体的制备方法

说明书

技术领域

本发明属于抗生素制剂领域，具体涉及替米考星脂质体剂型的制备方法。

背景技术

替米考星(Tilmicosin)是英国Elanco公司于20世纪80年代开发的半合成大环内酯类畜禽专用抗生素，在国外已经被批准用于治疗猪、牛、羊、鸡等动物的感染性疾病，特别是畜禽呼吸道感染，如家畜放线杆菌性胸膜肺炎、巴氏杆菌病以及鸡霉形体病等，对革兰氏阳性菌、部份革兰氏阴性菌、霉形体及螺旋体均有抑制作用。与泰乐菌素相比，替米考星的抗菌活性更强，具有用药量少(据报道皮下或静脉注射量10～20mg/Kg体重，一次见效)、作用持久等优势，是一种经济有效的畜禽常用抗菌和促生长药物。目前，主要药用的是替米考星的磷酸盐，常见可溶性粉、口服溶液、注射液等剂型。虽然替米考星相对于其他畜禽抗生素而言毒副作用较小，但有研究表明，用药量过大或采用静脉注射的给药方式也会对动物的心血管或肾脏造成一定的损伤。

脂质体作为一种靶向药物载体，可以将药物包埋在直径为亚微米或纳米级的脂质微粒中。这种微粒具有类似生物细胞膜结构，在体内可以生物降解，无免疫原性。脂质体的靶向和缓释作用能够延长药物的半衰期，提高药物的治疗指数，减少药物用量，降低药物的毒副反应。因此，为了在不增加药物剂量的情况下进一步提高替米考星的疗效，脂质体无疑是一种理想的选择。

近年来，国内外报道了较多关于阿米卡星、氟苯尼考等药物脂质体的研究，而关于替米考星脂质体的报道则非常少，制备方法还比较单一。

发明内容

本发明的目的旨在提供一种畜禽用抗生素--替米考星脂质体的制备方法，该方法步骤简单、可操作性强，制成的替米考星脂质体用于畜禽注射不易产生局部肿包现象。

基于上述目的，本发明采用了如下技术方案：替米考星脂质体的制备方法，每3g替米考星原粉经下述步骤制备成替米考星脂质体：

1)配制pH为6.5～7.5的PBS(Phosphate Buffered Saline)缓冲液；

2)取1～2g蛋黄卵磷脂、0.3～0.4g胆固醇、0.05～0.1g十八胺、0.3～0.7ml吐温-80、42～48ml乙醚混合，制成溶液；

3)取3g替米考星原粉、48～52ml步骤1)的PBS缓冲液，混合后倒入步骤2)制得的溶液中搅拌均匀，然后对搅拌均匀的混合液进行超声粉碎处理，使之分散成至少5min不分层的混悬液；

4)将步骤3)的混悬液转入旋转蒸发器中进行减压旋蒸，控制温度和压力使混悬液在旋蒸过程中不起泡、不沸腾并在2min～5min内全部凝到器壁上形成凝胶状的脂膜；

5)用步骤1)的PBS溶液反复冲洗器壁，将脂膜完全冲洗下来后继续减压蒸发直至抽干乙醚，即得替米考星脂质体粗品。

步骤4)的减压旋蒸共进行10～20min。

步骤5)中用49～52ml步骤1)的PBS溶液冲洗器壁。

步骤2)中配制溶液时为促进原料溶解需对体系进行加热，温度为55～75℃。

所述超声粉碎处理在细胞裂解仪中进行，超声频率60HZ，执行的是工作时间2s、间隙时间3s的间歇式工作模式，处理温度35℃，总处理时间17min。

用葡聚糖凝胶G-50柱层析法对所述的替米考星粗品进行精制。

所述的精制过程为：a)葡聚糖凝胶G-50用步骤1)的PBS溶液溶胀好后装入直径1cm、高15cm的层析柱中，装填好的柱子上端封口后于4℃下静置过夜以除去多余的PBS溶液；b)将所述的替米考星粗品放置到层析柱床面上，用纯化水淋洗，收集前10ml滴出液，即为替米考星脂质体精制品。

所述的层析柱为10ml一次性注射器；葡聚糖凝胶G-50的用量为3.5g，用35～50ml所述的PBS溶液将其溶胀。

对所述的替米考星脂质体精制品进行无菌分装，4℃保存。

本发明中的PBS缓冲液可参考如下方法配制：称取71.6g Na₂HPO₄·12H₂O配置成1000ml的水溶液；称取31.2gNaH₂PO₄·2H₂O配置成1000ml的水溶液；分别取62ml配好的Na₂HPO₄溶液和38ml NaH₂PO₄溶液混合均匀，过滤，121℃灭菌15min，即成pH为7.0左右的PBS缓冲溶液。