[发明专利]ACY W135群脑膜炎球菌多糖-b型流感嗜血杆菌结合疫苗

说明书

技术领域：

本发明提供了一种ACY W₁₃₅群脑膜炎球菌多糖-b型流感嗜血杆菌结合疫苗，用于脑脊髓膜炎重要疫病的免疫预防，属于疫苗生产制备技术领域。

背景技术：

流行性脑脊髓膜炎(流脑)主要发病人群是婴幼儿，ACY W₁₃₅群脑膜炎球菌多糖疫苗主要用于儿童尤其是婴幼儿预防使用，二十世纪八十年代，随着流脑多糖疫苗开发成功和纳入计划免疫，全球范围内接种人数逐年上升。我国的流脑发病以A群为主，因此开发的疫苗均为A群或A+C群双价疫苗，但是2000年在贵州、2004年在河北分别爆发了流脑，引起当地的恐慌，经流行病学调查证明，引起流行的是C群菌株，而在部分地区曾经分离到W₁₃₅群和Y群，尽管尚未引起流行，但也引起了疾病控制部门的重视。

b型流感嗜血杆菌(Hib)通过飞沫传播感染，引起五岁以下儿童鼻咽炎、会咽炎等原发性疾病；细菌从局部进入血液或通过血脑屏障，引起肺炎、化脓性脑膜炎、关节炎、骨髓炎、心包炎和败血症等严重的侵袭性疾病。

鉴于ACY W₁₃₅群脑膜炎球和b型流感嗜血杆菌引起疾病的严重性和疫苗的有效性，研发该疫苗具有极其重要的意义。在目前已使用Hib疫苗的38个国家中，其免疫程序遵照的原则是：1)在出生后2-6月龄之间完成基础免疫程序，每剂注射间隔至少1个月；2)出生后12-24个月之间可以进行一次加强免疫。遵照这一原则，ACY W₁₃₅群脑膜炎球菌多糖-Hib联合疫苗可用于流脑多糖、Hib结合苗免疫后的加强免疫。接种该疫苗可同时预防ACYW₁₃₅群引起的流行性脑脊髓膜炎及Hib导致的疾病。

本发明的目标是开发一种能提高疫苗覆盖率、减少儿童免疫次数及保护效果更佳的联合疫苗。

发明内容

本发明提供一种ACY W₁₃₅群脑膜炎球菌多糖-b型流感嗜血杆菌结合疫苗，具有一针多种免疫的功能。

本发明还提供了上述疫苗的生产工艺。

本发明的ACY W₁₃₅群脑膜炎球菌多糖-b型流感嗜血杆菌结合疫苗，每支成品(复溶后体积0.5ml)含以下组分及含量：

A群脑膜炎球菌多糖疫苗：        50μg

C群脑膜炎球菌多糖疫苗：        50μg

Y群脑膜炎球菌多糖疫苗：        50μg

W135群脑膜炎球菌多糖疫苗：     50μg

b型流感嗜血杆菌结合疫苗：      10μg

乳糖：                         2.5～3.0mg。

本发明联合疫苗的制备工艺，包括以下步骤：

1.菌种的选用：选用ACYW135群脑膜炎奈瑟氏球菌，b型流感嗜血杆菌菌种，用于冻干ACYW135群脑膜炎球菌多糖-b型流感嗜血杆菌结合疫苗的制备。

2.生产用种子

启开工作种子批菌种，经传代检定合格后，接种于综合培养基或其他适宜培养基，制备生产用种子。

3.生产用培养基

采用综合培养基，培养基不应含有与十六烷基三甲基溴化铵形成沉淀的成分。

4.培养

采用培养罐液体培养。在培养过程中取样进行纯菌检查，涂片做革兰氏染色镜检，如发现污染杂菌，应废弃。

5.收获和杀菌

于对数生长期的后期或静止期的前期终止培养。取样进行菌液浓度测定及纯菌检查，合格后在收获的培养液中加入甲醛溶液杀菌，或采用加热方法杀菌。以确保杀菌安全又不损伤其多糖抗原为宜。

6.去核酸

将已杀菌的培养液离心后收集上清液，加入十六烷基三甲基溴化铵，充分混匀，形成沉淀；离心后的沉淀物加入适量氯化钙溶液，其最终浓度为1mol/L，使多糖十六烷基三甲基溴化铵解离，加入乙醇至最终浓度为25％，2-8℃静置1-3小时或过夜，离心收集澄清的上清液。

7.沉淀多糖

于上述上清液中加入冷却乙醇至最终浓度为80％，充分振摇，离心收集沉淀，用无水乙醇及丙酮各洗2次以上，将沉淀物即为多糖粗制品，应保存在-20℃以下，待纯化。

8.多糖纯化