[发明专利]一种猪血凝性脑脊髓炎病毒胶体金抗原检测试纸条及其制备方法

权利要求书

1、一种猪血凝性脑脊髓炎病毒胶体金抗原诊断试剂条，在硝酸纤维素膜(3)的两端分别设有金标垫(2)和吸收垫(4)，金标垫(2)上端为样品垫(1)，其特征在于：金标垫(2)包被有纯化的HEV单克隆抗体胶体金偶联标记物，检测线(5)包被有纯化的兔抗HEV抗体，质控线(6)包被有正常抗小鼠IgG抗体，质控线(6)侧贴有吸收垫(4)。

2、权利要求1所述检测试纸条的制备方法，包括下述步骤：

①猪血凝性脑脊髓炎病毒抗原制备：将猪血凝性脑脊髓炎病毒接种长满单层的PK-15细胞，37℃CO₂培养箱内培养72h，制备猪血凝性脑脊髓炎病毒细胞培养液，采用差速离心、超速离心及蔗糖密度梯度离心纯化所培养的病毒，制成猪血凝性脑脊髓炎病毒纯化抗原；

②猪血凝性脑脊髓炎病毒单克隆抗体的制备：

应用上述所制备的纯化猪血凝性脑脊髓炎病毒免疫BALB/c小鼠，取其脾细胞与SP2/0骨髓瘤细胞进行融合，用间接ELISA和血凝抑制试验(HI)筛选，获得杂交瘤细胞株，猪血凝性脑脊髓炎病毒单克隆抗体；

③兔抗猪血凝性脑脊髓炎病毒多克隆抗体的制备：应用上述所制备的纯化猪血凝性脑脊髓炎病毒免疫家兔，分离血清制成兔抗猪血凝性脑脊髓炎病毒多克隆抗体；

④猪血凝性脑脊髓炎病毒单克隆抗体胶体金偶联标记物的制备：应用上述猪血凝性脑脊髓炎病毒单克隆抗体和氯金酸，采用柠檬酸钠标记法制得猪血凝性脑脊髓炎病毒单克隆抗体胶体金偶联标记物；

⑤猪血凝性脑脊髓炎病毒胶体金抗原诊断试剂条的组装：将纯化的猪血凝性脑脊髓炎病毒单克隆抗体用胶体金标记，喷点于玻璃纤维膜(3)上制备成金标垫(2)，将纯化的兔抗猪血凝性脑脊髓炎病毒多克隆抗体和购买的正常抗小鼠IgG抗体分别包被在硝酸纤维素膜(3)上的检测线(5)处和质控线(6)处。