[发明专利]15α羟基化左旋乙基甾烯双酮的生物制备方法

权利要求书

1.一种15α羟基化左旋乙基甾烯双酮的生物制备方法，其特征在于：制备 方法的步骤是；

(1)菌悬液的制备：将雷斯青霉Penicillium raistrickii ATCC 10490菌种接种于 斜面培养基，5天后，用无菌生理盐水制备出菌悬液；

(2)一级种子培养：将菌悬液接入种子培养基培养，接种量10⁶-10⁹个/mL，培 养温度为25-30℃，转速80-120r/s，培养时间24-96h，得到种子培养液；

(3)二级发酵培养：将种子培养液以2-5％的接种量接入发酵罐继续培养，发 酵控制条件为温度25-30℃，转速160-240r/min，通气量为2L/min，菌体培养时 间为36-72h，得到发酵液；

(4)底物诱导；在已培养好的发酵液内加入0.1-0.3g/L的左旋乙基甾烯双酮诱 导16-48h小时；

(5)左旋乙基甾烯双酮转化：加入底物进行微生物转化，采用将左旋乙基甾烯 双酮底物用促溶剂溶解后加入发酵液的转化方式，转化条件为转速 180-240r/min，转化温度为25-30℃，转化时间90-150h；

(6)萃取制备成品：料液经过滤，所得滤饼经萃取处理，即得15α羟基化左旋 乙基甾烯双酮，所述促溶剂包括甲醇、乙醇、丙二醇、甘油、1，3-丁二醇、聚乙 二醇、苯甲醇二甲亚砜、二甲基甲酰胺、丙酮、二甲基乙酰胺、乳酸乙酯、油酸 乙酯，促溶剂浓度1-6％。

2.根据权利要求1所述的15α羟基化左旋乙基甾烯双酮的生物制备方法， 其特征在于：所述步骤(6)中滤饼的萃取方法是将滤饼烘干后，以与原发酵液1∶ 10-1∶20的体积比采用萃取剂萃取。