[发明专利]一种测定畜牧粪便中抗生素的方法

说明书

【技术领域】

本发明属于环境中痕量污染物分析领域，具体地说是一种准确快捷测定畜牧粪便 中抗生素的方法。

【背景技术】

在畜牧行业中，抗生素长期以来用于动物疾病的治疗预防，监管不力和盲目滥用 的情况十分严重。抗生素以原形或其降解产物通过粪便和尿液的形式排放到环境当中， 研究表明粪便中土霉素浓度高达29mg/kg，金霉素26mg/kg，磺胺二甲嘧啶浓度高达100 mg/L，可能对环境产生难以估量的影响。

提取粪便中的抗生素可以利用无机溶剂或者有机溶剂，其中无机溶剂EDTA- McIlvaine缓冲液被广泛应用于环境样品中抗生素的测定。对于不同粪便的种类，物化 性质相差很大，例如猪粪便蛋白质、纤维素、脂肪等有机成分相对于鸡粪便要高，单 独的使用无机溶剂或者有机溶剂势必不能同事很好的提取两种粪便中的抗生素，应该 针对不同的粪便选择合适的提取溶剂。

测定粪便中的抗生素有超声波溶剂萃取、加压液相萃取和加速流体萃取。超声波 溶剂萃取是目前应用于粪便中抗生素测定的最广泛的一种手段，该方法在固/液萃取系 统中，将有机溶剂加入到固体样品中，在超声条件下萃取。这个技术基于气泡的崩解 导致的空穴效应，在水液中产生了高于50MPa的短期空气脉冲，温度高达5000K。 随着粪便样品结构的破坏，附着分析物分子被释放从而增强了萃取效率。通常要样 品需要剧烈振荡并超声波处理15-30min，重复萃取几次，回收率在60-80％左右。加压 液相萃取常用来代替传统的索氏萃取。样品置于不锈钢提取容器中，在高压(大于20 MPa)和高温(大于200℃)下进行，以提高溶解度和物质传输。由于压力高，溶剂表 现为液态，导致扩散系数显著增加。有机溶剂、液态的酸性以及中性的溶剂都可以用 于该法萃取。改方法的其它优点是溶剂使用量少，萃取时间短，而且全自动化操作， 缺点是操作技术要求比较高，购买仪器比较昂贵。

加速流体萃取技术是用溶剂对固体或半固体样品中欲分析组分进行萃取的技术， 具有萃取速度快，萃取效率高，可萃取的样品量范围宽，所用溶剂量较少以及易于自动 化等优点。然而，因为加速流体萃取是在高温高压下进行的，所以要特别注意分析组 分是否会分解，特别是对一些热不稳定化合物，更要注意分解问题，不适合处理热稳 定的抗生素。微波辅助溶剂萃取技术利用微波对萃取体系各组分选择性加热，可使欲分 析组分直接从基体中浸出，此时被萃取物是自由流向溶剂的，受溶剂亲和力影响小，固 可选择的溶剂种类比较多.由于微波萃取可将萃取液瞬间加热到常压沸点以上，提高 了萃取液的温度，又不致使被分析组分分解，缩短了萃取时间，提高了萃取效率。但是 还没有发现利用该技术处理粪便中抗生素。

抗生素在环境中为痕量存在，因此抗生素的检测方法成为相关研究的制约因素。 最早抗生素的检测采用的是生物学方法，该方法耗时长，灵敏度低，后来逐渐为高效 液相色谱法所取代，成为抗生素类药物检测的标准方法。液相色谱-紫外联用和液相 色谱-荧光联用等被广泛应用于环境中抗生素的检测，但是由于环境样品成分复杂， 紫外和荧光监测器的灵敏度和选择性往往不能满足实际样品的测定。随着技术的发展， 液相色谱串联质谱(LC-MS/MS)用由于其高灵敏度和定性能力，近年来广泛应用于环 境中抗生素的分析。毛细管电泳和放射性免疫也用于环境样品中抗生素测定，但该方 法是半定量方法，还需要采用液相色谱串联质谱做进一步确证。

综上所述，选择合适的提取溶剂，选用恰当的提取仪器和分析仪器，并优化其条 件才能建立一种准确快捷的测定畜牧粪便中抗生素的方法，以满足社会的需求。

【发明内容】

本发明的目的旨在为解决现有技术的问题，而提供一种准确快捷测定畜牧粪便中 抗生素的方法，该测定方法简单，快捷，并具有高回收率、低检出限、高灵敏性、抗 基质干扰，为进一步研究粪便中抗生素奠定基础。

本发明为解决上述问题所采用的方案是设计一种准确快捷测定畜牧粪便中抗生 素的方法。它的特征在于所述方法以EDTA-McIlvaine缓冲液或甲酸酸化的乙腈为提 取液，微波辅助萃取仪为提取装置，用固相萃取小柱进行浓缩净化，然后再用氮气吹 捕浓缩仪浓缩，最后用液相色谱串联质谱仪测定。

本发明的有益效果是：