[发明专利]突变型Aβ多肽刺激制备的阿尔茨海默病DC疫苗

说明书

技术领域

本发明是一种利用突变型β淀粉样蛋白多肽及其洐生物刺激致敏后的树突状细胞(Dendritic cell，DC)而获得的阿尔茨海默病(Alzheimer’s disease，AD)疫苗。

背景技术

AD是一种发病年龄早、发病率高、危害极大的中枢神经系统退行性变。多在60岁以上发病，其发病率随年龄增高而增高。美国阿尔茨海默病协会根据美国CDC的统计报道，截止2008年美国AD患者已经达到520万，全球AD患者已经接近3000万。65岁以上老人中有13％罹患此疾病，平均每71秒就有1名新发病例。而据估计到本世纪中期，全球的AD患者将达到1亿人，平均每33秒就将会有1名新发病例出现。随着我国人口渐趋老龄化，AD的发病率不断提高，寻找积极有效的预防及治疗措施，对于提高老年人口的生活质量，减轻家庭及社会的经济和精神负担具有非常重要的意义。

AD的特征性病理变化包括由β淀粉样蛋白(Amyloid beta，Aβ)在脑实质中沉积形成的老年斑(Senileplaques，SP)和神经细胞中高度磷酸化的τ蛋白沉积形成的神经原纤维缠结。随着淀粉样蛋白学说得到多方面实验证实并获得大多数人认同，人们提出了针对Aβ的各种AD治疗方案。其中利用抗Aβ抗体进行免疫治疗是促进机体清除已形成的Aβ的重要手段。许多使用抗Aβ抗体的体内外实验均证实Aβ免疫治疗能够减少Aβ沉积，提高AD模型鼠学习和记忆功能。Aβ主动免疫治疗，即AD疫苗，以其经济、便捷、作用维持时间长等优点而受到多数研究人员的青睐。

至今AD疫苗最接近成功的是Elan公司的AD疫苗AN1792。该疫苗由Aβ1-42多肽和QS-21佐剂构成。该疫苗在II期临床试验中却因300名试验者中有18名患者出现了非特异性脑膜脑炎的症状而被FDA终止了。尽管该试验失败了，但其中一些接受疫苗接种的AD患者却表现出良好的效果。其中许多患者血清中出现了高滴度的抗Aβ抗体，其抗血清能够与脑病理切片中的Aβ沉积物反应。随着随访时间的延长，产生了抗体的患者其认知功能减退程度显著低于未产生抗体者，且抗体滴度越高，差异越明显。此外，通过对死于脑膜脑炎并发症患者的尸检发现其脑内Aβ斑块明显少于未接种的AD患者，同时还发现有小胶质细胞的激活和T细胞向中枢神经系统的浸润。随后对发生脑膜脑炎患者的分析表明脑膜脑炎的病情与抗体反应的程度以及抗原表位的特异性并无直接关联。而且大多数出现抗Aβ抗体的患者并没有出现脑膜脑炎。这些情况都提示患者出现脑膜脑炎与针对Aβ的T细胞自身免疫反应有关，其中包括Aβ反应性Th1T细胞在外周的激活及其向Aβ斑块的浸润。多数学者认为，对于AN1792实验中的严重副反应，属于自身免疫发生激活的无菌性免疫炎症，与疫苗所用QS21佐剂有关。该佐剂以诱导Th1型反应为主，使IFN-γ之类的致炎因子产生，刺激T细胞产生Aβ反应性细胞毒性T细胞。而保护性抗体的产生需要Th2型反应激活B淋巴细胞。

但Aβ是正常神经元细胞结构蛋白的代谢产物，机体对其存在中枢性免疫耐受。只有通过添加佐剂等特定手段增强其抗原性才能较稳定地诱导产生抗体，不添加佐剂增强疫苗抗原性就难以保证获得抗体。如何避免佐剂的Th1型反应或是在不使用佐剂的情况下诱导Th2型反应，从而安全有效地获得Aβ抗体将是AD疫苗获得成功的关键。许多学者采用改良的Th2型佐剂、降低疫苗T细胞表位抗原、改变接种途径、制备DNA或RNA疫苗等多种方法制备不引起Th1型反应的AD疫苗。而本发明所采用的方法是利用树突状细胞(DC)的抗原递呈能力，制备能够引起机体产生足够抗体滴度的AD疫苗。经过我们的初步实验，证实这一种安全、有效、经济且使用简便的疫苗。

发明内容

本发明的基础之一是发现了突变型β淀粉样蛋白免疫原性比野生型β淀粉样蛋白强。经实验证实不同的突变型β淀粉样蛋白免疫原性有差异(多肽1～8)。从中我们选取了其中免疫原性较强的人工合成的双突变型多肽(多肽1)进行初步及后续实验。实验还包括了不同长度多肽免疫原性的研究(多肽9～11).

本发明的初步实验证实，采用野生型β淀粉样蛋白致敏DC不能诱机体产生抗Aβ抗体，而采用突变型AB多肽致敏DC则能诱导机体产生高滴度的抗Aβ抗体。