[发明专利]定量检测人血清TRAb板式荧光酶免方法及其应用

权利要求书

1.一种定量检测人血清TRAb板式荧光酶免方法，其特征在于用重组人促甲状激素受体hTSHR膜外区氨基端蛋白做抗原包被多孔板，用含1-5％BSA的PBST封闭；然后再以多孔板做载体加入抗hTSHR第一抗体或标准品、再依次酶标第二抗体、荧光底物和终止液，最后在荧光发光分析仪上测定荧光强度。

2.根据权利要求1所述的定量检测人血清TRAb板式荧光酶免方法，其特征在于所述抗原重组人促甲状激素受体hTSHR膜外区氨基端蛋白的氨基酸序列为：

Met Gly Cys Ser Ser Pro Pro Cys Glu Cys His Gln Glu Glu Asp Phe  16AA

1                        7                       13

Arg Val Thr Cys lys Asp Ile Gln Arg Ile Pro Ser Leu Pro Pro Ser  32AA

         19                      25                      31

Thr Gln Thr Leu lys Leu Ile Glu Thr His Leu Arg Thr Ile Pro Ser  48AA

                 37                      43

His Ala Phe Ser Asn Leu Pro Asn Ile Ser Arg Ile Tyr Val Ser Ile  64AA

49                       55                      61

Asp Val Thr Leu Gln Gln Leu Glu Ser His Ser Phe Tyr Asn Leu Ser  80AA

         67                      73                      79

lys Val Thr His Ile Glu Ile Arg Asn Thr Arg Asn Leu Thr Tyr Ile  96AA

                 85                      91

Asp Pro Asp Ala Leu lys Glu Leu Pro His Leu lys Phe Leu Gly Ile 112AA

97                      103                     109

Phe Asn Thr Gly Leu lys Met Phe Pro Asp Leu Thr lys Val Tyr Ser 128AA

        115                     121                     127

Thr Asp Ile Phe Phe Ile Leu Glu Ile Thr Asp Asn Pro Tyr Met Thr 144AA

                133                     139

Ser Ile Pro Val Asn Ala Phe Gln Gly Leu                         154AA

145                     151

3.根据权利要求1所述的定量检测人血清TRAb板式荧光酶免方法，其特征在于所述多孔板抗原包被是：在多孔板上每孔加16ng-200ng/100μl hTSHR，4℃过夜，然后漂洗，再用含1-5％BSA的PBST封闭液封闭，每孔加100μl，25-37℃温育1小时，再用PBST漂洗。

4.根据权利要求1所述的定量检测人血清TRAb板式荧光酶免方法，其特征在于所述加入抗hTSHR第一抗体是：用稀释液1∶50-1∶200稀释的人血清标本或已知量标准物在多孔板上每孔加100μl，25-37℃温育1小时后用PBST漂洗。

5.根据权利要求1所述的定量检测人血清TRAb板式荧光酶免方法，其特征在于所述加入酶标第二抗体是：在多孔板上每孔加1∶5000-1∶25000稀释的碱性磷酸酶标记的羊抗人IgG 100μl，25-37℃温育1小时后用PBST漂洗，再用PBS漂洗。