[发明专利]用于恶性肿瘤基因治疗的增殖和肿瘤细胞特异性基因操纵系统

权利要求书

1.一种高度增殖特异性真核细胞启动子PCNATAI，其核苷酸序列如序列表1或序列表2所 示。

2.一种权利要求1所述的高度增殖特异性真核细胞启动子PCNATAI的获得方法，其特征在 于所述的启动子PCNATAI是以人野生型增殖细胞核抗原PCNA启动子区全长或其-778～+61位核 苷酸序列为原型，并对其进行下列两个片段的改造得到：

第一、用腺病毒E1B TATA盒核苷酸序列AGGGTATATAATG取代PCNA启动子区原有的 -29～-21位核苷酸序列；

第二、用典型转录起始元件Inr核苷酸序列CCATTCC取代PCNA启动子区原有的-2～+5位 核苷酸序列，同时在其下游形成一个限制性内切酶Sac II的识别位点。

3.一种由Cre重组酶激活、以高度增殖特异性模式调控下游抑瘤或自杀基因表达的真核细胞 基因操纵系统PCNATAI-LoxP-stop-LoxP，其含有权利要求1所述的启动子PCNATAI，其核苷酸序 列如序列表3或序列表4所示。

4.一种权利要求3所述的真核细胞基因操纵系统PCNATAI-LoxP-stop-LoxP的获得方法，其 特征在于该方法包括：

第一、以权利要求1所述的启动子PCNATAI作为该操纵系统启动外源性治疗基因转录的核心 启动元件；

第二、在启动子PCNATAI下游端插入pBS302质粒的“LoxP-Stop-LoxP”序列作为该操纵系统 的转录阻遏元件，其中Stop为转录终止序列，LoxP为Cre重组酶的特异性识别序列。