[发明专利]利用基因工程菌株耦合发酵合成GDP-甘露糖体系的构建方法无效
| 申请号： | 200910070580.0 | 申请日： | 2009-09-25 |
| 公开（公告）号： | CN101671692A | 公开（公告）日： | 2010-03-17 |
| 发明（设计）人： | 李玉;孔董俊;王春霞;路福平 | 申请（专利权）人： | 天津科技大学 |
| 主分类号： | C12N15/70 | 分类号： | C12N15/70;C12P19/32;C12R1/19 |
| 代理公司： | 天津盛理知识产权代理有限公司 | 代理人： | 王来佳 |
| 地址： | 300457天津市*** | 国省代码： | 天津;12 |
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| 摘要： | |||
| 搜索关键词： | 利用 基因工程 菌株 耦合 发酵 合成 gdp 甘露 体系 构建 方法 | ||
1、一种利用基因工程菌株耦合发酵合成GDP-甘露糖体系的构建方法，其特征在于：构建方法包括以下步骤：
(1)基因扩增：根据大肠杆菌K-12基因组中己糖激酶基因glk、磷酸甘露糖变位酶基因manB和甘露糖-1-磷酸鸟苷酰转移酶基因manC的序列设计引物，扩增出大肠杆菌中的三个酶基因序列；
(2)重组质粒的构建：用酶切连接的方法分别将上述三种目的基因与载体pET-22b相连，得到携带酶基因的重组表达载体，并进行双酶切验证；
(3)基因工程菌株的构建：将上述验证正确的重组表达载体转化入宿主菌株BL21(DE3)中，得到含有重组质粒的三种基因工程菌株；
(4)混合发酵合成GDP-甘露糖：三个基因工程菌株的混合发酵，通过改变细胞通透性使工程菌株的产物作用于甘露糖合成GDP-甘露糖。
2、根据权利要求1所述的利用基因工程菌株耦合发酵合成GDP-甘露糖体系的构建方法，其特征在于：所述步骤(3)的三种基因工程菌株分别为：BL21(DE3)/pET-22b-glk、BL21(DE3)/pET-22b-manB和BL21(DE3)/pET-22b-manC。
3、根据权利要求1所述的利用基因工程菌株耦合发酵合成GDP-甘露糖体系的构建方法，其特征在于：所述步骤(4)混合发酵培养基的组成成分为g/L：BL21(DE3)/pET-22b-gL湿重25；BL21(DE3)/pET-22b-manB湿重15；BL21(DE3)/pET-22b-manC湿重25；甘露糖30；植酸5；KH2PO4 25；MgSO4.7H2O 5；ATP 5；Nymeen S-215 4。
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