[发明专利]根癌农杆菌介导的甘油氧化酶高产菌株的转化及筛选方法

权利要求书

1.一种日本曲霉菌株(Aspergillus japonicus)Ajyz0079，属于真菌界(Fungi)，子囊菌门(Ascomycota)，半知菌纲(Sphaeropsidales)，从梗孢目(Moniliales)，从梗孢科(Moniliaceae)，曲霉属(Aspergillus)；其菌落生长较快，10天直径就能够达到5-6厘米，绒状，紫褐色，反面幼时无色后变为淡紫褐色；分生孢子头球形，老后散列成几个松柱状结构，分生孢子梗光滑，顶囊球形或稍长，小梗单层，分生孢子球形或近球形，有明显的小刺。

2.一种根癌农杆菌介导的甘油氧化酶高产菌株的转化及筛选方法，其特征在于该方法包括以下步骤：

第一、将载体质粒通过三亲杂交的方法导入根癌农杆菌，其中所述的载体质粒含有构巢曲霉启动子PtrpC和相应的终止子TtrpC，在启动子的下游含有潮霉素B抗性基因；

第二、将上步得到的含有载体质粒的根癌农杆菌和日本曲霉混合培养后，转移到含有潮霉素B的培养基中，30℃培养得到潜在的转化子；

第三、将第二步得到的潜在的转化子在不含抗生素的培养基上传代后，再于含有潮霉素B的培养基中培养，得到潮霉素抗性遗传稳定的转化子。

3.根据权利要求2所述的方法，其特征在于第二步所述的日本曲霉为分生孢子。

4.根据权利要求3所述的方法，其特征在于所述的分生孢子的浓度为10⁴、10⁵、10⁶、10⁷或10⁸个/mL。

5.根据权利要求2所述的方法，其特征在于所述的潮霉素B的浓度为10μg/mL～60μg/mL。

6.根据权利要求2所述的方法，其特征在于通过该转化方法得到甘油氧化酶产量提高的转化子。

7.根据权利要求6所述的方法，其特征在于从获得的转化子中得到了一株甘油氧化酶产量比原始菌株提高50％的菌株，命名为Ajyz0079。