[发明专利]一种新西伯利亚银白杨的微繁方法

权利要求书

1.一种新西伯利亚银白杨的微繁方法，其特征在于新西伯利亚银白杨的微繁方法按以下步骤实现：一、将清洗后的新西伯利亚银白杨外植体在超净工作台上用质量浓度为75％的乙醇溶液浸泡60s后再用另一份质量浓度为75％的乙醇溶液浸泡60s，然后用无菌水冲洗3～5次，再用质量浓度为0.1％的氯化汞溶液消毒12～15min，然后用无菌水冲洗3～5次；二、将消毒后的外植体切割成带有1个顶芽或1～2个腋芽、且长度为1～2cm的茎段，然后接种于诱导培养基中，在温度为25～28℃、湿度为70％～80％、光照强度为40～60μmol·cm^-2·s^-1、每天光照16～18h的条件下培养至无菌芽生长长度为0.5～1cm；三、将经过步骤二处理和培养并增生出无菌芽的外植体连同增生的无菌芽一起转接于继代培养基中，在温度为25～28℃、湿度为70％～80％、光照强度为40～60μmol·cm^-2·s^-1、每天光照16～18h的条件下培养至无菌芽生长长度为2～5cm，即为微枝；四、将每个微枝从茎段上单独切离，然后接种于增壮培养基中，在温度为25～28℃、湿度为70％～80％、光照强度为40～60μmol·cm^-2·s^-1、每天光照16～18h的条件下培养至微枝生长长度为4～6cm；五、将增壮后的微枝切割成带有1个顶芽或1～2个腋芽、且长度为1～2cm的茎段，然后逐段接种于增殖培养基中培养至微枝生长长度为4～6cm，再扦插于生根基质中进行生根培养后即完成新西伯利亚银白杨的微繁；其中步骤二中诱导培养基是以改良MS固体培养基为基本培养基，且还包含0.5～1.0mg/L的6-苄基氨基嘌呤、0.05～0.1mg/L的奈乙酸和质量浓度为2.5～3.0％的蔗糖，pH值为5.6～6.0；步骤三中继代培养基是以改良MS固培养基为基本培养基，且还包含0.1～0.3mg/L的6-苄基氨基嘌呤、0.05～0.1mg/L的奈乙酸和质量浓度为2.0～2.5％的蔗糖，pH值为5.6～6.0；步骤四中增壮培养基是以MS固培养基为基本培养基，且还包含质量浓度为2.0～2.5％的蔗糖，pH值为5.6～6.0；步骤五中增殖培养基是以改良MS固培养基为基本培养基，且还包含0.1～0.3mg/L的6-苄基氨基嘌呤、0.05～0.1mg/L的奈乙酸和质量浓度为2.0～2.5％的蔗糖，pH值为5.6～6.0；步骤五中生根基质按体积比由25％的草炭土、30％的蛭石和45％的珍珠岩组成，生根基质含水量为50％～60％。

2.根据权利要求1所述的一种新西伯利亚银白杨的微繁方法，其特征在 于步骤一中用无菌水冲洗3次，再用质量浓度为0.1％的氯化汞溶液消毒13min，然后用无菌水冲洗3次。

3.根据权利要求2所述的一种新西伯利亚银白杨的微繁方法，其特征在于步骤二中外植体切割成带有1个顶芽或2个腋芽、且长度为1.5cm的茎段。

4.根据权利要求3所述的一种新西伯利亚银白杨的微繁方法，其特征在于步骤二中在温度为25℃、湿度为75％、光照强度为50μmol·cm^-2·s^-1、每天光照17h的条件下培养至无菌芽生长长度为1cm。

5.根据权利要求4所述的一种新西伯利亚银白杨的微繁方法，其特征在于步骤三中在温度为27℃、湿度为70％、光照强度为55μmol·cm^-2·s^-1、每天光照17h的条件下培养至无菌芽生长长度为4cm。

6.根据权利要求5所述的一种新西伯利亚银白杨的微繁方法，其特征在于步骤四中在温度为27℃、湿度为80％、光照强度为50μmol·cm^-2·s^-1、每天光照17h的条件下培养至微枝生长长度为5cm。

7.根据权利要求6所述的一种新西伯利亚银白杨的微繁方法，其特征在于步骤五中将增壮后的微枝切割成带有1个顶芽或2个腋芽、且长度为1.5cm的茎段，然后逐段接种于增殖培养基中培养至微枝生长长度为5cm。