[发明专利]一种从木豆根茎中提取、分离和纯化染料木素的方法

权利要求书

1.一种从木豆根茎中提取、分离和纯化染料木素的方法，其主要特征在于：木豆新鲜或干燥根茎匀浆诱导后经酶和酸诱导水解以增加游离的染料木素含量，诱导后固形物使用70-95％乙醇提取，诱导液及乙醇提取液合并浓缩后加入40-50℃水超声波振荡絮凝，静止，所得到絮凝物经乙酸乙酯负压空化混悬液固萃取、大孔吸附树脂法富集和一次正相硅胶中压柱层析后得到染料木素的制品，经过低温析晶和重结晶得到纯度大于95％的纯品。

2.按照权利要求1所述的从木豆根茎中提取、分离和纯化染料木素的方法，其特征在于：匀浆诱导所用的溶剂为水，温度40-50℃，体积为固体质量的4-8倍，连续诱导3次，每次1-5min；匀浆过程的强大剪切力使植物细胞壁破坏，细胞内酶、染料木素游离物和加合物以及各种前体底物向溶剂中充分释放，在匀浆机械胁迫诱导和自体内酶生物转化合成的双重作用下可提高染料木素含量。

3.按照权利要求1所述的从木豆根茎中提取、分离和纯化染料木素的方法，其特征在于：在提取过程中使用酶和酸对木豆新鲜或干燥根茎进行诱导水解；将匀浆诱导后的浆液用柠檬酸、冰醋酸或盐酸调PH为4.0-5.5；取0.2-0.8％固形物重量的复合酶，溶于pH为4.0-5.5的缓冲液中，在50-60℃水浴中激活8-15分钟；将激活后的复合酶缓冲液加入匀浆诱导浆液中，在温度为45-60℃的水浴上酶解5-10小时；通过诱导水解，在有效破除细胞壁的同时可以使染料木素葡萄糖苷、染料木素与纤维素和木质素等的结合体水解，使得游离染料木素含量显著提高，所用复合酶为纤维素酶、果胶酶、葡萄糖苷酶。

4.按照权利要求1所述的从木豆根茎中提取、分离和纯化染料木素的方法，其特征在于：乙醇提取液所提物质为匀浆诱导和酶和酸诱导后的固形物，提取方法选自超声波辅助提取、冷浸提取、超临界C02提取、微波辅助提取，所用溶剂为70-95％乙醇。

5.按照权利要求1所述的从木豆根茎中提取、分离和纯化染料木素的方法，其特征在于：木豆根茎提取物中加入水，温度40-50℃，体积为提取物质量的3-6倍，超声波振荡絮凝时间为20-30min，频率为50-60KHz，静止时间为15-20min；超声波的震荡作用使得粘稠絮凝物中包含的极性较大的杂质逐渐溶出，絮凝物富集了提取液中95～99％的染料木素。

6.按照权利要求1所述的从木豆根茎中提取、分离和纯化染料木素的方法，其特征在于：对絮凝物进行负压空化混悬液固萃取，所用溶剂除乙酸乙酯外还包括三氯甲烷、二氯甲烷，萃取所用的溶剂体积为提取物质量的0.5-2％(L∶g)，萃取次数为5-7次，所用压力为0.04-0.06MPa，有机相回收溶剂后可得目标固形物；该方法是以负压为动力，利用气泡产生的空化效应、湍流效应的一种强化液固萃取工艺。

7.按照权利要求1所述的从木豆根茎中提取、分离和纯化染料木素的方法，其特征在于：所用树脂选自D101、NKA-9、NKA-2、AB-8、AL-9、H103、ADS-7、ADS-8、ADS-17、ADS-21广谱性大孔吸附树脂，该方法中大孔树脂吸附步骤采用湿法装柱，保留液面，将负压空化混悬液固萃取所得到的固形物部分用20-30％乙醇溶液配制成料液浓度为2-4mg/mL混悬药液，同时将大孔吸附树脂采用湿法装柱，保留液面，将混悬的药液通过吸附柱，上样量为0.5-1BV，以流速为每小时6-8mL/g树脂、PH＝5条件下过吸附柱；吸附后用30-40％乙醇3BV洗杂质，然后用50-60％乙醇8-10BV解吸；收集解吸液，浓缩至干，所得固形物为粗目标产物。

8.按照权利要求1所述的从木豆根茎中提取、分离和纯化染料木素的方法，其特征在于：正相硅胶中压柱层析所用样品为树脂富集后所得固形物，所用硅胶为300-800目；预先称取质量为样品量的5-8倍的硅胶，采用湿法装柱，所用溶剂除三氯甲烷外，还包括二氯甲烷、乙酸乙酯；将样品用少量有机溶剂溶解，加入与浸膏质量比为1∶1.2(w/w)的层析硅胶拌匀、减压旋干，装入预先装好的硅胶柱中；先后以10-20BV三氯甲烷、三氯甲烷∶甲醇(20∶1)、甲醇连续中压洗脱，收集洗脱液，每份1/40-1/20BV；用硅胶薄层层析检测洗脱液成分，合并相同部分，展开剂为三氯甲烷∶甲醇＝30∶1-1∶1，紫外波长为254nm和360nm。

9.按照权利要求1所述所述的从木豆根茎中提取、分离和纯化染料木素的方法，其特征在于：重结晶所用的溶剂为石油醚、乙醚、正己烷、二氯甲烷、三氯甲烷、丙酮、乙睛和甲醇，重结晶所用溶剂比例为(石油醚、乙醚或正己烷)∶(三氯甲烷、二氯甲烷、丙酮、乙睛或甲醇)＝50∶1-1∶1，低温析晶温度为-10℃-25℃。