[发明专利]大环内酯类化合物及其制备方法

权利要求书

1.一种大环内酯类化合物，其特征在于大环内酯类化合物的结构为：

X-Y...R为CH＝C...H；

化合物1

或X-Y...R为CH₂-CH...OH；

化合物2。

2.一种制备权利要求1所述的大环内酯类化合物的制备方法，其特征是：制备化合物1和化合物2的方法为：将来源于产多拉菌素的细胞株，即由阿维链霉菌基因工程变异株(Streptomyces avermitilis strain NEAU1069)，是于2009年03月11日保藏于“中国生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心”，保藏登记号为：CGMCC NO.2943，命名为NEAU 1069(Streptomyces avermitilis)的菌株，经斜面培养、种子培养、摇瓶发酵、分离纯化而得；

其中，

所述的斜面培养为：培养基的组成包括可溶性淀粉20g、KNO₃ 1g、K₂HPO₄ 0.5g、MgSO₄·7H₂O 0.5g、FeSO₄·7H₂O 0.01g、琼脂20g和蒸馏水1000ml，pH值7.2～7.4，于1×10⁵Pa下灭菌30min，接菌后在28～32℃下培养4d；

所述的种子培养为：培养基的组成包括葡萄糖5～10g、可溶性淀粉5～10g、牛肉膏5～10g、蛋白胨10～18g、氯化钠5～8g和蒸馏水1000ml，pH值7.2，用250ml的三角瓶每瓶分装100ml，然后用1ml无菌水将斜面的冰城链霉菌孢子洗下并制成孢子悬浮液，使其浓度为1×10⁶～1×10⁷个/ml，每瓶加1ml孢子悬浮液，置于摇床上28～32℃培养24～36h；

所述的摇瓶发酵为：采用液体摇瓶发酵，培养基组成为小米10～30g加蒸馏水1000ml煮沸15min后滤去米粒，加入葡萄糖15～30g、碳酸钙2～15g、氯化钠5～12g和蛋白胨5～15g，pH值7.2～7.4，于1×10⁵Pa下灭菌30min，分装于250ml三角瓶，每瓶20～100ml，按体积比的接种量为10％，摇床转速150～240r/min，28～32℃振荡培养4～5d；

所述的分离和提纯的方法为：发酵液经100～200目筛网过滤后，滤渣用甲醇提取，提取液浓缩至一定体积后用EtOAc萃取，将萃取液浓缩后依次进行硅胶柱层析，RP-18柱层析所得到的化合物，得到两种无色的粉末状化合物1和化合物2。

3.根据权利要求书2所述的一种制备权利要求1所述的大环内酯类化合物的制备方法，其特征是：所述的硅胶柱层析用到的填料是200-300目的硅胶，流动相为石油醚和乙酸乙酯按不同比例混合进行梯度洗脱。

4.根据权利要求书2所述的一种制备权利要求1所述的的大环内酯类化合物的制备方法，其特征是：所述的RP-18是使用混合溶剂，即80∶20-95∶5和70∶30-90∶10的甲醇与水溶液进行梯度洗脱的。