[发明专利]氯化染料木素及其生物转化制备和应用方法

说明书

(一)技术领域

本发明涉及氯化染料木素及其生物转化制备方法以及在抗癌中的应用，具体说是利用一 从土壤中分离的微生物对染料木素进行生物转化制备氯化染料木素，以及氯化染料木素在抗 氧化及抗肿瘤方面的应用。

(二)背景技术

异黄酮属于黄酮类化合物的一种，由于其具多种生理功能而倍受关注。染料木素是异黄酮 的重要组成成分之一，具有雌性激素及抗雌性激素性质，并具有抗氧化作用，同时染料木素 还可以抑制酪氨酸蛋白激酶及拓扑异构酶II的活性。体外细胞及动物体内实验表明染料木素 还具有诱发细胞程序性死亡、提高抗癌药效和抑制血管生成的作用，它是一种很有潜力的癌 症化学预防剂，其抗癌作用及机制具有广泛的应用前景。

卤化物广泛存在于自然界中，不仅可以通过人工合成得到，也可以通过微生物生物体合 成而得到。到目前为止，已经分离出将近4000多种卤化代谢物，许多具有较好的生物活性。 由于卤化可以增强或降低母体化合物的生物活性，使得人们不断发现和探索新的此类化合物。

染料木素的氯化主要发生在A环的6位及8位和B环的3′位，迄今为止，所获得的氯化 染料木素包括：6-氯染料木素，8-氯染料木素，3′-氯染料木素，6，8-双氯染料木素，3′，6- 双氯染料木素。氯化作用可以改变染料木素的生物学效应，例如，与染料木素相比，3′-氯染 料木素的抗低密度脂蛋白氧化活性可以提高4倍左右，6，8-双氯染料木素则具有不同于染料 木素的雌性激素活性。

(三)发明内容

本发明的目的在于提供一种有助于转化产物的高效合成，而且环境污染少，成本低，可 广泛应用于大规模制备，转化产物具有较染料木素更加明显的抗氧化活性和抑制癌细胞增殖 活性的氯化染料木素。

本发明提供的氯化染料木素：8-氯染料木素，3′，8-双氯染料木素；经结构鉴定和检索3′， 8-双氯染料木素为一新化合物，并提供了氯化染料木素的生产制备方法，该方法可以在培养 基中直接加入底物染料木素/染料木苷或将含有染料木素/染料木苷的碳氮源的培养基与微生 物共培养，从而获得氯化染料木素；本发明还提供了该化合物在抗氧化及抗肿瘤方面的应用 方法。

本发明的技术方案之一为提供一类氯化染料木素，具有如下的结构式：

8-氯染料木素：R＝H；3′，8-双氯染料木素：R＝Cl

本发明的技术方案之二为提供上述氯化染料木素的制备方法，包括一下步骤：

A)将染料木素/染料木苷直接作为底物加入到培养基中与游动放线菌Actinoplanes sp. HBDN08共培养中或将含有染料木素/染料木苷的碳氮源物质的培养基与游动放线菌 Actinoplanes sp.HBDN08共培养；

B)利用高压液相层析或萃取/硅胶层析或萃取/硅胶/凝胶层析方法分离纯化获得产物。

本发明的技术方案之三为提供上述化合物在抗氧化及抗肿瘤方面的应用方法，与染料木 素相比，8-氯染料木素及3′，8-双氯染料木素具有更高的抗氧化活性；抗肿瘤实验显示8-氯 染料木素及3′，8-双氯染料木素在抑制人乳腺癌MDA-MB-231细胞生长方面，效果更强。

本发明涉及氯化染料木素及其生物转化制备方法以及在抗癌中的应用，具体说是利用一 从土壤中分离的微生物对染料木素进行生物转化制备氯化染料木素，以及氯化染料木素在抗 氧化及抗肿瘤方面的应用。

本发明的有益效果在于：

1.利用游动放线菌Actinoplanes sp.HBDN08建立了生物转化获得8-氯染料木素和3′， 8-双氯染料木素的方法。

2.通过核磁鉴定和检索，所得到的氯化染料木素3′，8-双氯染料木素为一新化合物。

3.8-氯染料木素和3′，8-双氯染料木素具有抗氧化和抗肿瘤的活性。

4.生物转化方法的改进，比如微生物育种、基因克隆与转化的方法，有助于氯化染料 木素更加高效的合成。

5.生物转化法成本较低，可广泛应用于大规模制备。

6.生物转化法是一种安全环保的方法，在大规模生产中不会对环境造成污染。