[发明专利]布鲁氏菌病抗体竞争酶联免疫吸附试验检测试剂盒

说明书

(一)技术领域

本发明涉及免疫学检验技术，具体说就是布鲁氏菌病抗体竞争酶 联免疫吸附试验检测试剂盒。

(二)背景技术

免疫学检测方法是应用免疫学理论设计的一系列测定抗原、抗 体、免疫细胞及其分泌的细胞因子的实验方法。随着学科间的相互渗 透，免疫学涉及的范围不断扩大，新的免疫学检测方法层出不穷。免 疫学方法的应用范围亦在日益扩大，不仅成为多种临床疾病诊断的重 要方法，也为众多学科的研究提供了方便。

抗原与相应抗体相遇可发生特异性结合，并在外界条件的影响下 呈现某种反应现象，如凝集或沉淀，藉此可用已知抗原(或抗体)检测 未知抗体(或抗原)。试验所采用的抗体常存在于血清中，因此又称之 为血清学反应(serological reaction)。

抗原种类繁多，按其物理性状可分颗粒性和可溶性两类。前者指 细胞性抗原(包括细菌抗原)，其制备较为简便，一般用新鲜细胞以无 菌生理盐水或磷酸缓冲液洗涤后配成一定浓度。若系细菌抗原，则取 新鲜培养物，经集菌作如下处理，H抗原因不耐热用0.3％～0.5％甲 醛处理，O抗原耐热可加热100℃2h去除H抗原后应用。可溶性抗原可 以是细胞膜、细胞浆、细胞核及核膜等细胞组成部分，也可能是经细 胞分泌至体液中的一些可溶性因子。细胞组成部分常需经过机械或酶 解法等破碎、离心获得粗制抗原，并通过选择性沉淀或层析等方法进 一步纯化。而体液中(如血清等)的可溶性抗原则可直接用生化手段获 得所需成分。有些可溶性抗原仅具有免疫反应性，而无免疫原性，此 类抗原尚需与载体偶联方可成为完全抗原。

布鲁氏菌病(Brucellosis)又称地中海弛张热，马尔他热，波 浪热或波状热，是由布鲁氏菌引起的人畜共患性全身传染病，其临床 特点为长期发热、多汗、关节痛及肝脾肿大等。1886年英国军医Bruce 在马尔他岛从死于“马尔他热”的士兵脾脏中分离出“布鲁氏菌”， 首次明确了该病的病原体。1897年Wright与其同事发现病人血清与布 鲁氏菌的培养物可发生凝集反应，称为Wright凝集反应，从而建立了 迄今仍用的血清学诊断方法。我国古代医籍中对本病虽有描述，但直 到1905年Boone于重庆对本病作正式报道。目前该病在世界分布，只 有几个国家消灭此病，而在中国的东北，华北，西北一带有流行和分 布，其它地区有散发，且日益广泛和危害严重。对畜牧业和人类来严 重经济损失。

布鲁氏菌是一类革兰阴性的短小杆菌，内毒素是重要的致病物 质。布鲁氏菌有强侵袭力，细菌可通过完整皮肤和粘膜进入宿主。布 鲁氏菌有6个生物型，我国流行的是羊布鲁氏菌，牛布鲁氏菌和猪布 鲁氏菌三种，其中以羊布鲁氏菌最常见。自然情况下，有60多种动物 可感染布鲁氏菌，其主要是山羊，绵羊，牛和猪，以流产为主，孕期 动物最为宜感。人类对布鲁氏菌易感，细菌进入人体后，迁延不愈， 反复发作，发热呈波浪式，如不治疗，后果严重。

根据临床症状、流行病学特点和特征性病变，不难做出布鲁氏菌 病的初步诊断，但由于在临床上小肠结肠炎耶氏菌、乙型副伤寒杆菌、 大肠杆菌O:157感染存在相似的症状，必须借助实验室诊断技术才能 对布鲁氏菌病进行最后确诊。

为了建立适合本病诊断和流行病学调查的快速、敏感、特异、准 确的方法，国内外许多学者进行了大量研究，并取得了显著的成绩。 先后建立了病原鉴定、荧光抗体中和检测等检测方法。然而，我国目 前应用的虎红平板和试管凝集方法为国际贸易淘汰方法，技术落后， 假阳性也相对较高。

(三)发明内容

本发明的目的在于提供一种满足我国动物防疫需求、敏感、特异、 能够准确诊断布鲁氏菌病的布鲁氏菌病抗体竞争酶联免疫吸附试验 检测试剂盒。

本发明的目的是这样实现的：它是利用平滑型布鲁氏菌的脂多糖 作抗原包被酶标板，用灭活菌液免疫健康牛或人工感染健康牛制备阳 性对照血清、标准弱阳性血清，用健康非免疫牛血清作阴性对照血清， 用单克隆抗体作竞争抗体，酶标二抗(羊抗鼠IgG)，配制血清稀释 液、洗涤液、底物溶液A、底物溶液B、H₂O₂、终止液，组装组成。

本发明布鲁氏菌病抗体竞争ELISA检测试剂盒，还有以下技术特 征：

1.所述的抗原包被酶标板是这样制备的：