[发明专利]一种新的制备脑蛋白水解物的方法有效
申请号: | 200910072481.6 | 申请日: | 2009-07-09 |
公开(公告)号: | CN101940596A | 公开(公告)日: | 2011-01-12 |
发明(设计)人: | 王佰荣;张树信 | 申请(专利权)人: | 张树信 |
主分类号: | A61K35/30 | 分类号: | A61K35/30;A61P25/00 |
代理公司: | 暂无信息 | 代理人: | 暂无信息 |
地址: | 150025 黑龙江省哈尔滨*** | 国省代码: | 黑龙江;23 |
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摘要: | |||
搜索关键词: | 一种 制备 蛋白 水解 方法 | ||
1.一种从哺乳动物脑组织中制备脑蛋白水解物的方法,其特征在于,包括如下步骤:
(1)胃酶液水解:取新鲜冷冻的哺乳动物脑组织,加纯化水或注射用水匀浆,匀浆液加入胃酶液搅拌均匀,水解,水解完毕加热微沸,过滤,得胃酶水解液;
(2)胰酶水解:胃酶水解液,加入胰酶,搅拌均匀,水解,过滤,得脑蛋白水解物粗提液;
(3)除碱性蛋白;
(4)超滤分离;
(5)纳虑浓缩;
(6)检查细菌内毒素,得脑蛋白水解物精制品。
2.如权利要求1所述的脑蛋白水解物的制备方法,其特征在于,包括如下步骤:
(1)胃酶液水解:取新鲜冷冻的哺乳动物脑组织,缓化,按照1∶1~2的比例加纯化水或注射用水,胶体磨匀浆,匀浆液加热80~90℃,保温10~20min,降温至35~40℃,调pH值为2.5~3.5,加入胃酶液搅拌均匀,37~45℃水解12~18h,水解完毕,加热微沸10min,100目滤布过滤,得胃酶水解液;
(2)胰酶水解:胃酶水解液调节pH值7.5~8.5,加入胰酶(按原料1%加入)加入激活剂,0.04mol/LCaCl2室温放置1小时加入胃酶水解液中,再用5mol/L NaOH调节pH值为7.5-8.0,45~55℃水解4h,水解完毕,调节pH值为4.0~5.0,按原料总量加入1%活性炭100℃加热15min,用100目滤布过滤,得脑蛋白水解物粗提液;
(3)除碱性蛋白:取脑蛋白水解物粗提液,调节pH值为9.0~10.0,加热80~90℃,保温10min,降温30℃以下,用滤纸过滤,得滤液;
(4)超滤分离:将(3)中所得滤液调pH值为6.5~7.5,用10000分子量的超滤柱超滤,超滤液冷冻48h;
(5)纳滤浓缩、活性炭处理:将(4)中所得冷冻的超滤液缓化,用0.8μm滤膜过滤,除去溶液中脂肪蛋白及杂蛋白,过滤液纳滤,纳滤液用6mol/LLHcl调pH值为4.0~5.0,并加入0.1~0.4%活性炭(w/w),充分搅拌下100℃保温10~40min,0.45μm微孔滤膜过滤,滤液补加两种注射用氨基酸。
(6)检查细菌内毒素:将(5)中所得滤液调整pH值为7.0~7.5,再经10000分子量的超滤柱超滤,超滤液取样检查细菌内毒素,合格后,得脑蛋白水解物精制品。
3.如权利要求1或2制备的脑蛋白水解物,其特征在于,含有活性多肽10~12mg/mL和唾液酸0.1~0.2mg/mL。
4.如权利要求2(5)(6)所述的脑蛋白水解物与一种或多种药用载体和/或稀释剂制的药物组合物,可以制成药学上可接受的任一剂型。
5.如权利要求2(5)(6)所述的脑蛋白水解物在制备治疗和/或预防脑功能障碍的药物中的应用。
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