[发明专利]一种新的制备脑蛋白水解物的方法

说明书

1、技术领域

本发明属于医药技术领域，具体涉及一种新的制备脑蛋白水解物的方法。

2、背景技术

脑蛋白水解物最早由奥地利EBEWE药厂以Cerebrolysin为商品名出售。脑蛋白水解物是是无蛋白质的标准化器官特异性氨基酸混合物的水溶液，其中含有多种人体必需的氨基酸、非必需氨基酸、活性多肽、唾液酸等，可用于颅脑外伤、脑血管病后遗症伴有记忆减退及注意力集中障碍，对于治疗器质性脑性精神综合症、脑血管代偿不足，神经衰竭状态，幼儿脑发育不全，癫痫中风、脑炎、脑震荡等具有良好的功效。

脑蛋白水解物中，游离氨基酸、活性多肽和唾液酸对脑功能障碍的恢复起着不可忽视的作用，但是现有的制备方法得到的脑蛋白水解物中游离氨基酸含量很低，尤其是游离氨基酸的含量非常低，达不到国家规定标准，众多脑蛋白水解物产品通过补加外源氨基酸以达到规定标准的要求，因此，国家药监办【2008】734号文件要求脑蛋白水解物不得补加外源氨基酸，所以，急需研发一种符合新修订国家标准，有效成分含量高的安全、有效、质量可控的天然脑蛋白水解物。

3、发明内容

本发明采用纳滤技术提供一种从哺乳动物脑组织中制备的脑蛋白水解物，使用该技术制备的脑蛋白水解物中唾液酸的含量较高，其很大优点在于通过血脑屏障并确保疗效，对于提高脑蛋白水解物的质量及质量可控性、保证脑蛋白水解物的安全性和有效性、扩大临床应用具有重要的意义。

本发明的技术方案如下：

一种从哺乳动物脑组织中制备脑蛋白水解物的方法，包括如下步骤：

(1)胃酶液水解：取新鲜冷冻的哺乳动物脑组织，加纯化水或注射用水匀浆，匀浆液加入胃酶液搅拌均匀，水解，水解完毕加热微沸，过滤，得胃酶水解液；

(2)胰酶水解：胃酶水解液，加入胰酶搅拌均匀，水解，过滤，得脑蛋白水解物粗提液；

(3)除碱性蛋白；

(4)超滤分离；

(5)纳虑浓缩；

(6)检查细菌内毒素，得脑蛋白水解物精制品。

本发明脑蛋白水解物的制备方法，优选为：

(1)胃酶液水解：取新鲜冷冻的哺乳动物脑组织，缓化，按照1∶1～2的比例加纯化水或注射用水，胶体磨匀浆，匀浆液加热80～90℃，保温10～20min，降温至35～40℃，调pH值为2.5～3.5，加入胃酶液搅拌均匀，37～45℃水解12～18h，水解完毕，加热微沸10min，100目滤布过滤，得胃酶水解液；

(2)胰酶水解：胃酶水解液调节pH值7.5～8.5，加入胰酶胰酶液，搅拌均匀，45～55℃水解4h，水解完毕，调节pH值为4.0～5.0(按原料重量加入1％活性炭)，100℃加热20min，用100目滤布过滤，得脑蛋白水解物粗提液；

(3)除碱性蛋白：取脑蛋白水解物粗提液，调节pH值为9.0～10.0，加热80～90℃，降温30℃以下，用滤纸过滤，得滤液；

(4)超滤分离：将(3)中所得滤液调pH值为6.5～7.5，用10000分子量的超滤柱超滤，超滤液冷冻48h；

(5)纳滤浓缩、活性炭处理：将(4)中所得冷冻的超滤液缓化，用0.8μm滤膜过滤，除去溶液中脂肪蛋白及杂蛋白，过滤液纳滤，调pH值为4.0～5.0，并加入0.1～0.4％活性炭(w/w)，充分搅拌下保温10～40min，0.45μm微孔滤膜过滤，滤液补加两种注射用氨基酸。

(6)检查细菌内毒素：将(5)中所得滤液调整pH值为7.0～7.5，再经10000分子量的超滤柱超滤，超滤液取样检查细菌内毒素，合格后，得脑蛋白水解物精制品。

所述的哺乳动物指人除外的其他哺乳动物，包括猪、牛、马、羊、兔、狗等，优选猪、牛。

本发明进一步要求通过上述方法制备的脑蛋白水解物，本发明的脑蛋白水解物含有活性多肽10～12mg/mL和唾液酸0.1～0.2mg/mL。

本发明进一步要求保护本发明的脑蛋白水解物与一种或多种药用载体和/或稀释剂制的药物组合物，可以制成药学上可接受的任一剂型。

用于口服给药时，可制成常规的固体制剂，如片剂、胶囊剂、丸剂、颗粒剂等；也可制成口服液体制剂，如口服溶液剂、口服混悬剂、糖浆剂等。制成口服制剂时，可以加入适宜的填充剂、粘合剂、崩解剂、润滑剂等。用于肠胃外给药时，可制成注射剂，包括注射液、注射用无菌粉末与注射用浓溶液。制成注射剂时，可采用现有制药领域中的常规方法生产，配制注射剂时，可以不加入附加剂，也可根据药物的性质加入适宜的附加剂。