[发明专利]一种肠道益生菌固态营养载体培养方法

说明书

(一)技术领域

本发明涉及的是一种肠道益生菌固态营养载体培养方法，生产的固态营养载体益生菌不需要分离冻干，可直接作为益生菌服用，常温下可长期保存，活力不但不降低且有所升高。比液态培养益生菌的产品及益生菌冻干粉有诸多优点和较高的活力，其货架寿命显著的延长。其方法是将两歧双歧杆菌、嗜酸乳杆菌、嗜热链球菌、德氏乳杆菌保加利亚亚种、青春双歧杆菌、长双歧杆菌、、短双歧杆菌、婴儿双歧杆菌、鼠李糖乳杆菌、干酪乳杆菌、植物乳杆菌、动物双歧杆菌等乳酸菌在含有琼脂、明胶、鱼胶粉、果冻粉的营养载体上直接培养，培养一定时间后即可作为产品。

(二)技术背景

益生菌(Probiotics)是一类改善人类肠道微生态平衡，对人体健康具有调理作用的有益的微生物，它们主要是通过维护肠道的微生态平衡而起到促进人体健康的作用，它的生理学功能得到全世界科技界普遍认同。全世界每年发表关于研究益生菌的论文极其丰富，概括起来益生菌具有以下几方面的作用：

(1)提高免疫力：双歧杆菌和嗜酸乳杆菌可产生大量的免疫球蛋白。从而激活机体的免疫细胞，使得外在菌难以留存体内，达到免疫调节作用。(2)改善胃肠道功能：双歧杆菌和嗜酸乳杆菌在肠道粘膜表面形成保护屏障，抵御有害菌对肠道粘膜的侵袭破坏，能产生乳酸和醋酸等酸性物质，造成不利于有害菌生长的环境，抑制有害菌的生长、繁殖，起到调节肠道菌群的作用。(3)营养作用：双歧杆菌和嗜酸乳杆菌在人体肠道内发酵后可产生乳酸和醋酸，能提高钙、磷、铁的利用率，促进铁和维生素D的吸收，产生维生素K及维生素B，产生乳糖酶帮助消化乳糖。(4)通肠润便：双歧杆菌和嗜酸乳杆菌在肠内可产生大量的短链脂肪酸等酸性物质，能刺激肠道蠕动，增加粪便湿度，起到通便的效果。(5)恢复因使用抗生素后而被破坏的肠道正常微生物菌群：抗生素是引起肠道菌群失调的重要因素。抗生素在杀灭有害菌的同时，也杀灭了很多的有益菌，及时补充双岐杆菌和嗜酸乳杆菌，对帮助肠道恢复菌群平衡、提高营养吸收能力是非常必要的。(6)降低胆固醇、防止动脉硬化。(7)抑制内毒素的产生，延缓衰老。(8)抑制肠道中致癌因子的产生，预防肿瘤的发生。(9)抗辐射等。因此，肠道微生态制剂的研究已成为当前世界微生物学领域一个研究重点。目前，虽然市场上益生菌产品极其丰富，但是，益生菌产品只有液体益生菌和益生菌冻干粉两种形式。而采用固态营养载体培养肠道益生菌，培养成熟，经包装后作为活性较高、且易于长期保存的固态营养载体益生菌则具有极大的创新性。这项技术的研究和开发会给人类的健康带来积极的促进意义，同时也具有重要的经济价值和社会效益。

(三)发明内容

本发明的目的在于提供一种肠道益生菌固态营养载体培养方法，它包括两歧双歧杆菌、嗜酸乳杆菌、嗜热链球菌、德氏乳杆菌保加利亚亚种、青春双歧杆菌、长双歧杆菌、、短双歧杆菌、婴儿双歧杆菌、鼠李糖乳杆菌、干酪乳杆菌、植物乳杆菌和动物双歧杆菌这12种乳酸菌在含有琼脂、明胶、鱼胶粉、果冻粉的营养载体上，在特定的各种材质、各种形状、各种大小的密闭的无菌培养容器中直接进行培养，培养一定时间后，经过包装即可作为产品。

培养方法步骤如下：

(1)首先分别培养试管斜面菌种，斜面菌种培养基中加入琼脂，使琼脂浓度达到2％，然后培养16-72小时，然后接入三角瓶液体培养基中进行分别培养，20℃-45℃培养8-72小时，逐级进行扩大培养，然后再分别进行发酵罐发酵培养，20℃-45℃培养8-72小时，使发酵液中益生菌总数达到1.0×10⁴-1.0×10⁹/mL，此培养液作为种子液；

三角瓶液体培养基与发酵罐培养基制作方法为：将蛋白胨0.1-100.0克、浓度为2.0％-25％的南瓜汁5-200mL、浓度为2.0％-25％的西红柿汁5-200mL、浓度为2.0％-25％的胡萝卜汁5-200mL、乳清粉1.0-5.0克、大豆浸汁2.0％-25％、葡萄糖1.0-15.0克、乳糖1.0-15.0克、牛肉膏0.1-10.0克、酵母膏0.1-10.0克、柠檬酸钠0.1-10.0克、醋酸钠0.1-5.5克、磷酸氢二钾0.1-2.5克、硫酸镁0.01-0.75克，食用香精0.001-5克、色素0.001-5克，加水定容至1000毫升，pH5.0-7.0，105℃灭菌15分钟。

(2)将培养成熟的种子液按浓度为0.01-20.0％单独或混合接入制备好的固态营养载体中，彻底混合均匀，然后将接种的固态营养载体在38℃-55℃注入到密闭的无菌培养容器中，然后冷却至38℃以下凝固，再置于20℃-45℃下培养10-120小时，观察待长出肉眼可见的菌落，进行检验分析，包装成产品。