[发明专利]一种聚乙二醇化的1,2-二脂肪酰磷脂酰乙醇胺的制备方法

说明书

技术领域

本发明涉及一种聚乙二醇的活化工艺和聚乙二醇化的1，2-二脂肪酰磷脂酰乙醇胺的制备方法。

背景技术

脂质体作为一种新型药物载体，具有靶向、长效、可降低药物毒性及增加药物稳定性等多方面的优点，但同时也存在一定的缺点，如易氧化水解、易聚集、稳定性差。为了弥补这些不足，聚乙二醇(PEG)衍生化的新型脂质体应运而生，它是在脂质体表面包裹一层亲水性的聚乙二醇膜，可以有效地延长脂质体体内循环时间，提高脂质体物理、化学及生物稳定性。此类脂质体又称长循环脂质体。由于PEG衍生化脂质体具有很好的应用前景，因此聚乙二醇化的磷脂的合成成为目前研究的热点。

聚乙二醇具有电中性、无毒、良好的生物相溶性的特点。但是双羟基的聚乙二醇在活化反应过程中容易发生交联和团聚，为避免交联和团聚，通常使用甲氧基聚乙二醇(下文称为MPEG)，其分子式为CH₃-(O-CH₂-CH₂)n-OH，甲氧基聚乙二醇末端的羟基是化学反应的功能基团，但其反应活性差，必须将羟基活化才能与磷脂反应。

在制备聚乙二醇活化产物的方法中：

1991年，US5,013,556中公开了一种使用羰基二咪唑活化甲氧基聚乙二醇的方法，形成酰胺键，这种化学键比较稳定，但由于需要使用苯作溶剂，毒性太大，属于药品生产中限制使用的一类溶剂。

在文献Appl.Biochem.Biotechnol.11(1985)141-152中使用三氯苯基碳酰氯法，首先由三氯苯酚与光气反应制备三氯苯基碳酰氯，然后再与PEG进行活化反应，此反应由于光气参与反应，毒性很强。

在文献China Journal of Pharmaceuticals 2003.34(10)501-503方法中，使用吡啶做催化剂，以二琥珀酰亚胺碳酸酯活化PEG，得到甲氧基聚乙二醇琥珀酰亚胺酯(式II化合物)，反应时间长，需要反应24小时。

在文献Bioconjugate.Chem.4(1993)568-569方法中，反应后需要用丙酮精制多次才能得到产品，操作繁琐，增加了成本。

甲氧基聚乙二醇经过活化后，再与1，2-二脂肪酰磷脂酰乙醇胺(式III化合物)反应，即可得到PEG化的1，2-二脂肪酰磷脂酰乙醇胺(式I化合物)。目前报道的方法中多是药用蛋白的PEG化，而式III化合物的PEG化的方法则很少。

在US5,672,662方法中，使用式III化合物与活化剂甲氧基聚乙二醇丙酸琥珀酰亚胺酯(MPEG-SPA)反应，生成甲氧基聚乙二醇丙酸-二脂肪酰磷脂酰乙醇胺，此方法要求低温超滤，增加成本，并且时间很长。

文献Digest of The World Latest Medical Information2003.Vol.2(5)817-820则采用N-羟基丁二酰亚胺活化甲氧基聚乙二醇丁二酸甲酯，然后再与式III化合物反应得到式I化合物，但此方法需要使用柱层析分离纯化，这种方法不适合工业化生产。

I，其中R为13、15、17脂肪碳链，n的取值范围是22～682

II，其中n如上所定义       III，其中R如上所定义

发明内容

本发明目的是克服现有方法存在的溶剂毒性大、操作繁琐、收率低等不足之处，提供了一种聚乙二醇活化工艺以及1，2-二脂肪酰磷脂酰乙醇胺的制备方法。

本发明提供的技术方案是：

(1)MPEG溶于极性有机溶剂中，在有机碱催化作用下，加入二琥珀酰亚胺碳酸酯反应，析晶、精制，即可得到式II所示的甲氧基聚乙二醇琥珀酰亚胺酯。其中有机碱选自三乙胺或三丁胺，反应式为：

有机溶剂选自乙腈、二甲基亚砜、丙酮、四氢呋喃或二氧六环。

MPEG、二琥珀酰亚胺碳酸酯和三乙胺或三丁胺的摩尔比为1.0∶2.0～20∶5.0～20，其中优选比为1.0∶2.0～15∶5.0～18。

反应温度为0～50℃。

反应时间为1～10小时。

析晶的有机溶剂选自低级酯、低级醚或5～6个碳的烷烃，其中低级酯选自乙酸乙酯或乙酸丁酯，低级醚选自乙醚或异丙醚，5～6个碳的烷烃选自正己烷、环己烷或石油醚。

精制用的溶剂为低级醇，选自乙醇、异丙醇或叔丁醇。

聚乙二醇的分子量范围为1000～30000。