[发明专利]棉籽壳栽培料常压灭菌效果指示菌的获得及利用方法

权利要求书

1.一种获得棉籽壳栽培料常压灭菌效果指示菌的方法，其特征在于， 该方法包括依次进行下列步骤：

(1)配制杂菌分散细菌培养基：其配方为棉籽壳栽培料1～50％、蛋 白胨1％、酵母浸粉0.5％、氯化钠0.5％、磷酸氢二钾0.2％、琼脂粉 1.5～2％，制作时先用部分水冷浸提栽培料中杂菌，然后将滤液与预溶的 其它组分混合煮沸，随即分装成试管，试管封口；

(2)进行不同时长的常压蒸汽灭菌处理：用常压蒸汽灭菌法处理(1) 中的杂菌分散细菌培养基，处理时间按等差时长排列，时长的最大取值长 于全部杀死杂菌所需的时间；

(3)在较低常温下恢复培养：用20～24℃温度培养上述(2)中经常压 蒸汽灭菌法处理的杂菌分散细菌培养基；

(4)拣出最抗常压灭菌条件的残留菌：杂菌分散细菌培养基经上述(3) 培养后，在达到完全杀菌状态前培养基中最后出现的单孢菌落就是最抗常 压灭菌条件的残留菌，将该菌转接到细菌培养基上留存；

(5)检验残留菌在棉籽壳栽培料上的生长能力：检验用培养基配方为 含有0～5％麸皮的棉籽壳栽培料5～50％、琼脂粉1.5～2％，制作时取 棉籽壳栽培料煮汁制成试管斜面，接种(4)中拣出的残留菌后20～24℃培 养，若在24～36小时在试管斜面培养基上能形成明显菌落，表明该残留 菌具有在棉籽壳栽培料上生长的能力，是与栽培菌类生长所需营养一致的 菌类，然后将该残留菌经固体发酵制成残留菌麸皮菌剂，进入检验其是否 具有指示常压灭菌效果能力的步骤；

(6)检验残留菌是否具有指示常压灭菌效果的能力：将等重量的棉籽 壳栽培料和在(5)中所制备的残留菌麸皮菌剂分别作为验证用材料；根据 验证材料拌加水情况，分设干料、湿料、水浸料三种料处理状态，分装在 无菌试管内；将上述装有棉籽壳栽培料和装有残留菌麸皮菌剂的无菌试管 同时进行不同时长的常压灭菌处理；含有干料和湿料的试管灭菌后，无菌 条件下灌注常规细菌培养基后摆放成斜面，含有水浸料的试管灭菌后直接 摆放成斜面；然后在20～24℃下培养不同时长；比较同一处理状态下装 有棉籽壳栽培料和装有残留菌麸皮菌剂的试管中细菌恢复生长的情况，判 定残留菌对常压灭菌效果的指示能力：若装有残留菌麸皮菌剂的试管中没 有残留菌菌落出现，同时，在经同一常压灭菌时间处理的装有棉籽壳栽培 料的试管中已经且均没有细菌菌落产生，则表明该残留菌具有指示常压灭 菌效果的能力，即是所要获得的棉籽壳栽培料常压灭菌效果指示菌。

2.如权利要求1所述的方法，其特征在于：所述试管封口采用棉花 或透气胶塞塞封。

3.一种通过权利要求1所述方法所获得的棉籽壳栽培料常压灭菌效 果指示菌的利用方法，其特征在于：将指示菌制成直观型指示剂，其中直 观型指示剂由含有指示菌芽孢、增色剂的灭菌固体粉状细菌培养基组成； 用透明耐高温瓶分装成指示剂瓶，指示剂瓶加水伴随棉籽壳栽培料灭菌， 灭菌固体粉状细菌培养基凝结成块后，具有与指示菌菌落颜色反差大的颜 色，培养后出现的指示菌菌落能够直接观察到，指示菌菌落的出现情况则 用于判定棉籽壳栽培料常压灭菌效果，标准是：若指示剂瓶培养基表面出 现大面积近白色不透明的菌苔或大量菌落，则表明该批次料灭菌不达标； 若不出现菌落，则表示灭菌达标。