[发明专利]人工合成猪生长激素基因及其表达纯化方法无效
| 申请号： | 200910075520.8 | 申请日： | 2009-09-21 |
| 公开（公告）号： | CN101665788A | 公开（公告）日： | 2010-03-10 |
| 发明（设计）人： | 柴宝峰;梁爱华;张振兴;王伟;付月君;申泉;张志云 | 申请（专利权）人： | 山西大学 |
| 主分类号： | C12N15/18 | 分类号： | C12N15/18;C12N15/70;C12P21/02;C07K14/61;C07K1/14;C12R1/19 |
| 代理公司： | 山西五维专利事务所（有限公司） | 代理人： | 杨耀田 |
| 地址： | 030006山*** | 国省代码： | 山西;14 |
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| 摘要： | |||
| 搜索关键词： | 人工合成 生长激素 基因 及其 表达 纯化 方法 | ||
【权利要求书】：
1.一种人工合成的猪生长激素PGH基因，其特征在于，它是序列表中SEQ ID NO1的 核苷酸序列。
2.如权利要求1所述的人工合成的猪生长激素基因的表达纯化方法，其特征在于，包 括如下步骤：
(1)构建含有人工合成的PGH基因的重组质粒pET-28a+-PGH；
(2)将重组质粒pET-28a+-PGH转化至宿主细胞BL21(DE3)中，得到含有重组质粒的工程 菌株；
(3)将工程菌株接种到LB培养基溶液中培养，当工程菌培养液浓度OD600达到0.6-0.8时， 加入0.5mmol/L IPTG，37℃诱导表达6小时，得到高效表达的PGH包涵体；离心，弃上清， 清洗包涵体；
(4)逐滴加入pH为12的含有2mol/L尿素的100mmol/L Tris缓冲液，溶解PGH包涵体；
(5)按0.1mL/min逐滴缓慢加入pH8.5，含有50mmol/L Tris、sucrose 5％、2mol/L Urea的 复性缓冲液，4℃温育2小时，13000rpm，4℃离心30min，取上清，得到可溶性的PGH；
(6)用superdex-75凝胶层析的方法去除可溶性PGH中的尿素，得到目的蛋白PGH。
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