[发明专利]狂犬病毒CTN株全基因组感染性cDNA克隆及其制备方法和应用

权利要求书

1.狂犬病毒CTN株全基因组感染性cDNA克隆，其特征在于，该cDNA克隆的核酸序列为SEQ ID No.1所示。

2.权利要求1所述的狂犬病毒CTN株全基因组感染性cDNA克隆的制备方法，其特征在于，其包括下列步骤：(1)利用CTN株狂犬病病毒全长基因组内的单一限制性酶切位点将病毒全长基因组分成四段进行扩增，在扩增同时去除伪基因处423bp碱基，代之以绿色荧光蛋白基因，最后克隆入pVAX-R表达载体，载体序列如SEQ ID No.24所示；构建成病毒基因组全长质粒；(2)用RT-PCR扩增CTN株狂犬病病毒的核蛋白、磷蛋白、糖蛋白和转录大蛋白基因序列，并将扩增片段直接克隆入pVAX1载体中，构成反向遗传系统中的4个辅助质粒；(3)将上述5个质粒共同转染细胞，最终获得狂犬病毒CTN株全基因组感染性cDNA克隆；

所述步骤(1)中扩增引物序列为SEQ ID No.2和SEQ ID No.3、SEQ ID No.4和SEQ ID No.5、SEQ ID No.6和SEQ ID No.7、SEQ ID No.8和SEQ ID No.9所示，共4个引物对。

3.根据权利要求2所述的狂犬病毒CTN株全基因组感染性cDNA克隆的制备方法，其特征在于，所述PVAX-R表达载体的构建方法为将pVAX1载体的多克隆酶切位点处切除，代之以锤头状核酶、由9个限制性酶切位点组成的linker和丁型肝炎核酶序列。

4.根据权利要求3所述的狂犬病毒CTN株全基因组感染性cDNA克隆的制备方法，其特征在于，所述的9个限制性酶切位点为Kpn I、EcoR I、BssH II、Asc I、Nhe I、Pme I、Pst I、ApaI和Not I酶切位点。

5.根据权利要求2所述的狂犬病毒CTN株全基因组感染性cDNA克隆的制备方法，其特征在于，所述核蛋白的扩增引物为SEQ ID No.10和SEQ ID No.11所示；所述磷蛋白的扩增引物为SEQ ID No.12和SEQ ID No.13所示；所述糖蛋白的扩增引物为SEQ ID No.14和SEQ ID No.15所示；所述转录大蛋白的扩增引物为SEQ ID No.16和SEQ ID No.17、SEQ ID No.18和SEQ ID No.19、SEQ ID No.20和SEQ ID No.21、SEQ ID No.22和SEQ ID No.23所示的4对引物对。

6.构建权利要求1所述的狂犬病毒CTN株全基因组感染性cDNA克隆的表达 载体PVAX-R，其特征在于，所述的表达载体的核苷酸序列如SEQ ID No.24所示。

7.权利要求1所述的狂犬病毒CTN株全基因组感染性cDNA克隆在制备狂犬病疫苗中的应用。

8.权利要求1所述的狂犬病毒CTN株全基因组感染性cDNA克隆作为病毒载体的应用。