[发明专利]检测帕金森病的蛋白标志物、试剂盒及其应用

说明书

技术领域

本发明涉及检测帕金森病的蛋白标志物、试剂盒及其应用，属于生物技术领域。

背景技术

随着人类基因组计划的完成，生命科学又迎来了后基因组时代的挑战——人类蛋白质组学(Proteome)。因为人类基因组虽然包含了我们身体的全部遗传信息，但那也只是制造蛋白质的设计图纸。而构成细胞并表现各种生命现象则是由蛋白质通过其发挥生理功能来完成的。因此，惟有蛋白质才是生命现象的表现者和承担者。蛋白质也是机体各种不同类型细胞之间差异的决定因素，尽管所有的细胞都拥有同样的基因组，但在不同的细胞内会有不同的基因处于开放(表达)状态，从而合成不同的蛋白质。同样，病变细胞和正常细胞的差异在很大程度上也是由功能基因及其合成蛋白质的不同来决定的。

帕金森病(Parkinson′s Disease，PD)是临床最常见的神经变性疾病之一。帕金森病的临床期检测主要依靠症状和体征。由于缺乏疾病特异性生物标志物和有效的实验室辅助检测方法，所以帕金森病在临床前期无法检测。当帕金森病发展到临床期时，其患者的中脑多巴胺能神经元蜕变已达70％。因此，早诊早治是目前改善食管癌患者长期生存的最佳途径。帕金森病的辅助检测方法如嗅觉测试、影像学(PET、SPECT)检查等尚在探索之中。这些检测结果似乎也能对临床期帕金森病的检测提供支持，但它们的敏感性和特异性都无法满足临床需要，或不能对帕金森病的早期检测及基础研究提供明确的信息。SPECT和PET等影像学检查由于花费昂贵、需要应用示踪剂(存在放射性损伤)、需要特殊仪器等，难以在临床大规模地推广。而体液(血清、血浆、尿液和脑脊液)的生物标志物由于检测方法简便、快速、来源相对丰富，特别适合于临床的大规模检测或筛查，是未来发展的方向。迄今为止，人们仍在积极地、不懈地寻找帕金森病特异的或相关的生物标记物。如帕金森病患者外周血的丙二醛、超氧阴离子自由基、DNA氧化修饰的产物8-羟基脱氧鸟苷及RNA氧化产物8-羟基鸟苷[16]等氧化应激指标的水平与正常对照相比存在差异。帕金森病患者外周血淋巴细胞多巴胺转运体的活性降低。帕金森病患者血小板单胺氧化酶B的活性增加而血浆β-苯乙胺的水平降低。但是，这些所谓的标志物无论是单用还是联合应用，均没有足够的敏感性和特异性来用于帕金森病的检测。

发明内容

本发明的第一个目的是提供可用于检测帕金森病的一组特异性强、灵敏度高的蛋白。

本发明的第二个目的是提供一种操作简便、结果准确的可用于检测帕金森病的试剂盒。

本发明的第三个目的是提供一种快捷、准确、方便的检测帕金森病的方法。

为了实现上述目的，本发明采用以下技术方案：

一组检测帕金森病的蛋白标志物，由血清蛋白质组图谱中的5个不同分子量的蛋白质组成：A：2961Da、B：4309Da、C：5234Da、D：6121Da和E：8170Da。

一种检测所述蛋白标志物的试剂盒，由以下成分组成：

1)以羧基为配基的纳米磁珠；

2)裂解液：9M Urea，20g/L CHAPS，10g/IL DTT，50mMTris-HCl，pH9.0；

3)缓冲液：50mM NaAC，pH4.0；

4)去离子水；

5)芥子酸；

6)0.5％v/v三氟乙酸；

7)50％乙腈；

8)蛋白质阅读仪；

9)质控血清。

所述试剂盒在检测帕金森病中的应用，其特征在于，包括以下步骤：

1)利用裂解液处理待测血清样本30min；

2)利用以羧基为配基的纳米磁珠捕获血清蛋白；

3)洗脱以羧基为配基的纳米磁珠，并用蛋白质阅读仪检测血清中的5个特异蛋白；

4)质控血清检测结果为阴性；受试样品检测结果重复性CV应小于10％，否则，此次实验视为无效。受试样品中5个蛋白质符合A：2961Da≤3.89μJ；B：4309Da≤4.39μJ；C：5234Da≤3.49μJ；D：6121Da≤1.53μJ；E：8170Da＞15.06μJ为阴性，有一项或多项蛋白不符合则为阳性。