[发明专利]人禽流感特异性免疫球蛋白及其制备方法有效
| 申请号： | 200910080588.5 | 申请日： | 2009-03-23 |
| 公开（公告）号： | CN101508733A | 公开（公告）日： | 2009-08-19 |
| 发明（设计）人： | 张小梅;高正伦;蔡芳;陈江婷;丘远征;尹卫东 | 申请（专利权）人： | 北京科兴生物制品有限公司 |
| 主分类号： | C07K16/10 | 分类号： | C07K16/10;A61K35/16;A61K39/42;A61P31/16 |
| 代理公司： | 北京三高永信知识产权代理有限责任公司 | 代理人： | 何文彬 |
| 地址： | 100085*** | 国省代码： | 北京;11 |
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| 摘要： | |||
| 搜索关键词： | 禽流感 特异性 免疫球蛋白 及其 制备 方法 | ||
1.一种制备人禽流感特异性免疫球蛋白的方法，包括以下步骤：
(1)用NIBRG-14病毒株接种鸡胚，经培养、收获病毒液、灭活病毒和 纯化后制成禽流感疫苗；
(2)将制备的禽流感疫苗免疫接种供血浆者，在最后一次免疫后第0～6 个月采血；
(3)将抗禽流感病毒血浆于0～4℃，1×104转/分钟离心20～40分钟；
(4)在0～4℃温度条件下，取上清加入饱和硫酸铵溶液，使硫酸铵的质 量百分比浓度为40～50％；搅拌12～20小时后5000～8000转/分钟离 心20～50分钟，收集沉淀；
(5)在0～4℃温度条件下，将步骤(4)得到的沉淀加入0.01mol/L PBS 溶液，完全吹溶后5000～8000转/分钟离心20～40分钟，得到上清； 在上清中添加固体溴化钾使浓度为1.2～1.8mol/L，搅拌1～4小时后 5000～8000转/分钟离心1～3小时；
(6)重复步骤(5)的操作1～3次；
(7)将步骤(6)的产物加入0.01mol/L PBS溶液吹溶后进行蔗糖密度梯 度离心，转速为2×104转/分钟，蔗糖梯度质量百分比浓度为8～10％、 12～15％、18～20％、35～40％，收集梯度离心产物；
(8)将梯度离心产物用0.01mol/L pH7.2的PBS溶液超滤，0.20～0.25μm 的滤膜过滤；
(9)在pH5.0条件下，60℃灭活10小时；
(10)将灭活后的产物用0.01mol/L pH7.2的PBS溶液进行超滤，得到禽 流感免疫球蛋白原液；
所述供血浆者是哺乳动物。
2.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，所述的哺乳动物选自 牛、猪或羊。
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