[发明专利]与衰老相关退行性疾病的线粒体ND3基因SNP G10320A分子标记、检测方法及试剂盒

权利要求书

1、一种与衰老相关的退行性疾病线粒体ND3基因SNP G10320A分子标记，其特征在于，DNA序列如SEQ ID No.1所示。

2、根据权利要求1所述的与衰老相关的退行性疾病线粒体ND3基因SNP G10320A分子标记，其特征在于，所述SEQ ID No.1中第10320位点存在一个分子标记SNPG10320A。

3、根据权利要求2所述的与衰老相关的退行性疾病线粒体ND3基因SNP G10320A分子标记，其特征在于，所述SEQ ID No.1的第10320位点分子标记为G或A。

4、一种检测权利要求2所述的线粒体ND3基因SNP G10320A分子标记的方法，其特征在于，其具体步骤如下：

(1)提取基因组DNA；

(2)线粒体ND3基因单核苷酸多态性识别：

制备混合液：步骤(1)制备的基因组DNA溶液、PCR缓冲液、dNTP、Taq DNA聚合酶、PCR引物、PLUS+饱和荧光染料、寡核苷酸探针和纯水；

PCR条件：在95℃5分钟，95℃1分钟，63.5℃30秒，72℃10秒，72℃7分钟，进行35个循环；反应完成后，将PCR产物再进行两个变性和复性的循环，95℃变性30秒，25℃复性2分钟，共2个循环；

(3)将步骤(2)制备的样本进行高分辨熔解曲线分析。

5、根据权利要求4所述的检测线粒体ND3基因SNP G10320A分子标记的方法，其特征在于，所述PCR引物为：

碱基序列如SEQ ID No.2所示的：

F1：5’-ATTTGATCTAGAAATTGCCCTCC-3’；

碱基序列如SEQ ID No.3所示的：

R1：5’-TrGTAGTCACTCATAGGCCAG-3’。

6、一种用于检测权利要求2所述的线粒体ND3基因SNP G10320A分子标记的特异性引物，其特征在于，其长度为21～23bp，碱基序列如SEQ ID No.2所示的

F1：5’-ATTTGATCTAGAAATTGCCCTCC-3’；碱基序列如SEQ ID No.3所示的R1：5’-TTGTAGTCACTCATAGGCCAG-3’。

7、根据权利要求6所述的特异性引物，其特征在于，所述的特异性引物可以扩增出含有mtDNA10320位点的ND3基因序列。

8、一种检测权利要求2所述的线粒体ND3基因SNP G10320A分子标记的试剂盒，其特征在于，该试剂盒由以下试剂组成：

(1)130ul纯水；

(2)20ul 10X PCR缓冲液；

(3)4ul 10mM dNTP混合液；

(4)20ul 1unit/ul Taq DNA聚合酶；

(5)2ul 1pmol/ul F1引物；

(6)2ul 10pmol/ul R1引物；

(7)20ul 1XLCGreen PLUS+饱和荧光染料，

(8)探针：2ul 10pmol/ul C1；

其中引物F1碱基序列如SEQ ID No.2所示，R1如SEQ ID No.3所示；探针C1碱基序列如SEQ ID No.4所示。

9、权利要求8所述的检测线粒体ND3基因SNP G10320A分子标记的试剂盒用于预测衰老相关的退行性疾病的应用。

10、根据权利要求9所述的检测线粒体ND3基因SNP G10320A分子标记的试剂盒的应用，其特征在于，所述衰老相关的退行性疾病为：中风、心血管疾病、2型糖尿病、帕金森病和/或老年性痴呆。