[发明专利]一种筛选疾病标志物的方法无效
| 申请号： | 200910083074.5 | 申请日： | 2009-04-28 |
| 公开（公告）号： | CN101538614A | 公开（公告）日： | 2009-09-23 |
| 发明（设计）人： | 谭蔚泓;上官棣华;方晓红;王柯敏;杨朝勇 | 申请（专利权）人： | 谭蔚泓 |
| 主分类号： | C12Q1/68 | 分类号： | C12Q1/68;C12N15/10;C40B30/04;C12P19/34;C12Q1/48 |
| 代理公司： | 北京纪凯知识产权代理有限公司 | 代理人： | 关 畅 |
| 地址： | 100190北京市海淀区*** | 国省代码： | 北京;11 |
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| 摘要： | |||
| 搜索关键词： | 一种 筛选 疾病 标志 方法 | ||
1、一种筛选疾病标志物的方法，包括如下步骤：
(a)用离体的靶疾病细胞对核酸文库进行筛选，得到与靶疾病相关的核酸适体；所述核酸文库为单链的随机核苷酸序列的文库；
(b)将所述与靶疾病相关的核酸适体与所述离体的靶疾病细胞上的靶分子结合，得到所述核酸适体和所述靶分子的复合物，再分离所述复合物，得到所述靶疾病细胞上的靶分子，即为靶疾病标志物。
2、根据权利要求1所述的方法，其特征在于：在所述步骤(a)后、步骤(b)前，包括将所述核酸适体标记的步骤。
3、根据权利要求1或2所述的方法，其特征在于：所述步骤(a)中筛选的方法包括如下步骤：
(1)以所述核酸文库为起始核酸文库；
(2)将所述起始核酸文库的溶液与所述离体的靶疾病细胞孵育，得到所述靶疾病细胞与起始核酸文库中部分核酸分子的复合体，分离复合体，得到与所述离体的靶疾病细胞结合的核酸文库；
(3)将所述与所述离体的靶疾病细胞结合的核酸文库的溶液与离体的非靶疾病细胞孵育，分离去除与所述离体的非靶疾病细胞结合的核酸分子，剩余没有与所述非靶疾病细胞结合的核酸分子；
(4)得到与靶疾病相关的核酸适体。
4、根据权利要求3所述的方法，其特征在于：所述步骤(2)中，在所述得到与所述离体的靶疾病细胞结合的核酸文库后，包括如下步骤：PCR扩增所述与离体的靶疾病细胞结合的核酸文库，并制备成单链。
5、根据权利要求3或4所述的方法，其特征在于：所述步骤(3)中，在所述剩余没有与所述非靶疾病细胞结合的核酸分子后，包括如下步骤：PCR扩增所述没有与所述非靶疾病细胞结合的核酸分子，并制备成单链。
6、根据权利要求3-5中任一所述的方法，其特征在于：所述步骤(a)中筛选的方法中，在所述步骤(3)之后、步骤(4)之前，包括至少1次以下操作：以所述没有与所述非靶疾病细胞结合的核酸分子为起始核酸文库，重复步骤(2)和(3)，每次操作均以前一次操作中得到的没有与所述非靶疾病细胞结合的核酸分子为起始核酸文库。
7、根据权利要求3-6中任一所述的方法，其特征在于：所述步骤(a)中，在所述得到与靶疾病相关的核酸适体后、所述将所述核酸适体标记前，包括对所述核酸适体进行修饰的步骤；所述修饰的方法为对所述核酸适体进行剪切、对所述核酸适体中的核苷酸单元进行替换、对所述核酸适体中的碱基、核糖或磷酸骨架进行修饰。
8、根据权利要求1-7中任一所述的方法，其特征在于：所述步骤(b)中，将所述与靶疾病相关的核酸适体与所述离体的靶疾病细胞上的靶分子结合的方法为将所述与靶疾病相关的核酸适体与所述靶疾病细胞的裂解液共同孵育。
9、根据权利要求1-8中任一所述的方法，其特征在于：所述疾病为白血病。
10、根据权利要求9所述的方法，其特征在于：所述疾病标志物为蛋白酪氨酸激酶7。
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