[发明专利]猪细小病毒LAMP检测试剂盒及其检测方法

权利要求书

1.一种猪细小病毒LAMP检测试剂盒，其特征在于是由病毒DNA提取试剂和LAMP 反应体系试剂以下两部分组成：

(1)病毒DNA提取试剂组分的配方如下：

1)DA：1％2-巯基乙醇溶液10ml、pH8.0 10mmol/mL Tris-HCL 3ml、10mmol/ml EDTA 1ml，灭菌双蒸水加至30ml；

2)DB：200mmol/ml NaOH 15ml、1％SDS溶液15ml，终体积为30ml；

3)DC：无水乙醇75ml，pH4.8 200mmol醋酸钠1ml；

4)DD：RNAse A 50u、无核酶水加至100ml；

(2)LAMP反应体系试剂组分的配方如下：

1)LAMP反应体系试剂中所使用的一组引物是：

F3：ACTAATCCATCAGACGCC

B3：GTCTGTTTCTGAGAGTTTTGG

FIP：TCAGCTGCTGAGAAGTAGAAGTATG-GCAGCAAAAGAACACGAC

BIP：TTCATAAAAGAAACTGAACACGCAA-CACGCTTTGCTCTGAAGA；

2)引物混合液PB：100pmol/μl F3 引物 2.5μl、100pmol/μl B3 引物 2.5μl、 100pmol/μl FIP 引物 20μl，100pmol/μl BIP 引物 20μl、灭菌去离子水5μl，终体积 为50μl；

3)反应缓冲混合液RB：4mmol/μl硫酸镁 50μl、1.6mol/μl甜菜碱 50μl、10mmol/μl dNTPs 50μl，475μl PCR级水，终体积为625μl；

4)反应酶混合液EB：8U/μl Bst大片段DNA聚合酶 48μl，0.1μmol/μl DTT 2μl， 终体积为50μl；

5)显色剂：SYBRgreenI 1μl、PCR级水 49μl，终体积为50μl。