[发明专利]猪圆环病毒2型LAMP检测试剂盒及其检测方法

权利要求书

1.一种猪圆环病毒2型LAMP检测试剂盒，其特征在于是由病毒DNA提取试剂和含有序 列1、2、3和4引物的LAMP反应体系试剂两部分组成。

2.如权利要求1所述一种猪圆环病毒2型LAMP检测试剂盒，其特征在于其中的病毒DNA 提取试剂组分的配方如下：

1)DA：1％2-巯基乙醇溶液10ml、pH 8.010mmol/mLTris-HCL 3ml、10mmol/ml EDTA 1ml，灭菌双蒸水加至30ml；

2)DB：200mmol/ml NaOH 15ml、1％SDS溶液15ml，终体积为30ml；

3)DC：无水乙醇75ml，pH 4.8 200mmol醋酸钠1ml；

4)DD：RNAse A 50u、无核酶水加至100ml。

3.如权利要求1所述一种猪圆环病毒2型LAMP检测试剂盒，其特征在于其中的LAMP 反应体系试剂组分的配方如下：

1)引物混合液：

LAMP反应体系试剂中所使用的序列1、2、3和4的引物是：

PB1：ATCACAAGGACAACGGAGTG

PB2：GCCCCACAATGACGTGTAC

PB3：GCTCTGCAACGGTCACCAGAACCTCTCTACTGCTGTGAGT

PB4：TTGTCAGAAATTTCCGCGGGCTTTCGTCTTCCAATCACGCTT

100pmol/μl PB1引物2.5μl、100pmol/μl PB2引物2.5μl、100pmol/μl PB3引物20μl， 100pmol/μl PB4引物20μl、灭菌去离子水5μl，终体积为50μl；

2)反应缓冲混合液：

4mmol/μl硫酸镁50μl、1.6mol/μl甜菜碱50μl、10mmol/μl dNTPs 50μl，475μl PCR 级水，终体积为625μl；

3)反应酶混合液：8U/μl Bst大片段DNA聚合酶48μl，0.1μmol/μl DTT 2μl，终 体积为50μl；

4)显色剂：SYBRgreenI 1μl、PCR级水49μl，终体积为50μl。