[发明专利]一种检测TP抗体的磁性免疫层析试纸条及其制备方法

权利要求书

1.一种检测TP抗体的磁性免疫层析试纸条，其特征在于：该试纸条是将包被膜、结合了TP抗原的磁颗粒垫、样品垫、吸水垫依次相互交错2mm地粘贴在底板上，然后在上层覆盖透明塑料密封膜组装而成，其中所述的包被膜上预包被有TP抗原检测线和质控线。

2.根据权利要求1所述的检测TP抗体的磁性免疫层析试纸条的制备方法，其特征在于：包括以下步骤：

1)抗原的处理：选用基因工程技术制备的商品化TP重组配对抗原，对20mM，pH7.0-7.6的PBS 4℃透析过夜；

2)包被膜的制备：使用0.02mM，pH7.0-7.6的PBS，分别将TP包被抗原和生物素化牛血清白蛋白稀释到0.5-1.5mg/ml的浓度，使用定量喷液装置分别将二者以0.5-1.2cm的间隔喷印于硝酸纤维素膜上，晾干后于封闭液中浸泡10分钟后于25-35℃烘干8小时，加入干燥剂封存备用；

3)磁颗粒垫的制备：

A、链亲和素化磁颗粒的制备：选用直径为100-300nm的超顺磁颗粒，使用含有0.1％Tween-20的50mM，pH4.5-5.0的醋酸钠缓冲液洗涤磁颗粒，加入碳二亚胺和琥珀酰亚胺使二者终浓度均为20mmol/L，室温反应1小时，使用含有0.1％Tween-20的50mM，pH4.5-5.0的醋酸钠缓冲液充分洗涤磁颗粒后加入链亲和素使链亲和素与磁颗粒的分子比例为5∶1(摩尔比)，室温反应3小时，加入含有0.5％BSA的0.02M，pH7.0-7.6的PBS室温封闭30分钟，使用含有0.1％Tween-20的50mM，pH4.5-5.0的醋酸钠缓冲液洗涤磁颗粒，然后使用含有1％PVP，1％casein，0.5％Tween-20，5％蔗糖的50mM，pH8.2-9.0的硼酸保存缓冲液复溶磁颗粒，4℃保存备用；

B、生物素化TP抗原的制备：将TP抗原对0.02M，pH7.0-7.6的PBS 4℃透析过夜，调整浓度为2mg/ml，将预活化生物素使用二甲基亚砜溶解，终浓度为50mM，以10∶1的分子比例向抗原或抗体溶液中加入所需量的生物素溶液，室温反应1小时，对0.02M，pH7.0-7.6的PBS 4℃透析过夜，加入等体积甘油后-20℃保存备用；

C、生物素化抗原与链亲和素化磁颗粒的混合，以0.25μl/mg磁颗粒的量向链亲和素化磁颗粒溶液中加入生物素化TP抗原，以0.15μl/mg磁颗粒的量加入生物素化，充分混匀后使用保存缓冲液以1∶5-1∶20的比例(体积比)将混合物稀释待喷涂玻璃纤维垫使用；

D、磁颗粒垫的制备：将制备好的磁颗粒使用定量喷膜装置以10μl/cm的量均匀喷涂于玻璃纤维上，冷冻干燥后加入干燥剂封存备；

4)样品垫的处理：将样品垫放入样品垫处理溶液中浸泡处理1小时后取出25-35℃烘干8小时；所述的样品垫处理液是含有0.5％-2.5％BSA和0.1％-1％的聚乙烯醇，以及0.01-0.2％吐温-20的0.02M，pH7.0-7.6的磷酸盐缓冲溶液；

5)试纸条的组装：在透明塑料底板上依次相互交错2mm贴上包被膜、磁颗粒垫、样品垫、吸水垫，然后在上层覆盖透明塑料密封膜得到试纸板，根据要求的宽度切割即得到试纸条。