[发明专利]一种检测TP抗体的磁性免疫层析试纸条及其制备方法

说明书

技术领域

本发明是涉及医学检验领域的一种检测TP抗体的磁性免疫层析试纸条及其制备方法。

背景技术

梅毒的病原体是一种螺旋体，梅毒螺旋体是一种小而纤细的呈螺旋状的微生物，长度为5-20nm，直径＜0.2nm。梅毒患者的皮肤、粘膜中含梅毒螺旋体，未患病者在与梅毒患者的性接触中，皮肤或粘膜若有细微破损则可得病。极少数可通过输血或其它途径传染。获得性梅毒(后天)：早期梅毒病人是传染源，95％是通过不洁性交传染，少数通过接吻，握手，输血，接触污染的内衣湿毛巾，茶杯、烟斗、哺乳、尿布等传染。胎儿梅毒(先天)：孕妇体内螺旋体，一般在妊娠3-4月通过胎盘感染婴儿。

潜伏梅毒虽无症状，介螺旋体继续潜伏在体内重要器官，数年乃至数十年后会出现三期梅毒，如眼、鼻损害、心血管梅毒、神经梅毒、精神失常等，甚至死亡。女性梅毒患者妊娠后，梅毒螺旋体可以通过母血到胎盘，破坏胎盘后传给胎儿。妊娠6-7周时胎儿即被传染，发生流产、死胎、早产等。胎传梅毒儿，可有皮肤、骨骼、牙齿、肝脾等脏器梅毒损伤，在出生2年后陆续表现出来，严重的可有眼盲、脑损害等。

梅毒血清试验是诊断梅毒的主要方法。一期梅毒硬不疳时，血清试验可阴性此时可取硬下疳的渗出液或腹沟淋巴穿刺液放玻璃片上，看螺旋体的运动状态来诊断。到下疳后半期，血清试验阳性率很高。

目前的TP血清学诊断技术主要包括快速血浆反应素环状卡片实验(RPR)，甲苯胺红不加热血清试验(TRUST)，病毒特异性抗体酶联免疫试验(ELISA)，化学发光(CLIA)，免疫层析法(胶体金或乳胶颗粒法)，荧光螺旋体抗体吸收实验(FTA-ABS)，梅毒螺旋体血细胞凝集试验(TPHA)，梅毒螺旋体特异抗体试验(TPPA)，免疫印迹法(WB)等，这些方法都有各自的特点和使用对象。

RPR方法快速简便，费用低，但由于结果判读易受影响，逐渐被TRUST实验取代，而TRUST实验则不适用于大量血样的筛查，ELISA法是目前临床血液筛查中普遍使用检测技术，但是ELISA试验操作程序复杂，容易出现假阳性或假阴性结果，且灵敏度低，CLIA与ELISA方法类似，只是灵敏度提高了一些，并没有根本解决ELISA存在的问题，并且二者都存在操作繁琐，反应时间长的问题，而且都需要酶标仪或发光仪和洗板机以及温箱等复杂设备，而且不能单人份检测，进一步限制了他们在一些基层医院、诊所的应用。近几年国内外出现了以胶体金或乳胶颗粒为代表的快速检测试纸条，但是由于结果是肉眼目视观察，容易受观察者主观判断的影响，灵敏度低，结果准确度不高。FTA-ABS，TPHA和TPPA以及WB是目前临床梅毒检测的几种确认方法，结果准确可靠，但是要么实验过程复杂，需要昂贵的仪器设备(如FTA-ABS)，要么试剂稳定性差(如TPHA)要么技术难度大，全世界只有屈指可数的几家公司可以生产(如WB)，高昂的使用成本使得它们目前仅用于可疑标本的确认，而很少用于血样筛选。

磁性免疫层析(Mgnetic ImmunoChromatographic Test，MICT)是近年来出现的的一种新一代单人份快速定量检测技术。是以超顺磁性颗粒(superPMPs)代替传统的标记物(胶体金，乳胶颗粒等)来进行免疫层析，通过检测结合在超顺磁性纳米微粒上的生化物质来提供对生物样品的定量检测数据。通过检测测量磁场强度来表达标记在样品区域的量，采用标记的免疫复合物-磁场强度的标准曲线，从而达到定量的目的。该技术与传统技术相比具有下述优势：1)分析灵敏度：比各类目测快速诊断法灵敏10-100倍；2)分析速度：可在15秒内测量到多达6个分析位点的数据；3)线形范围：在1-104的浓度范围内呈线性；4)所用磁性检测仪器采用固相元件，微型化设计自成一体，独立运行，体积小，操作简便；5)超顺磁性纳米微粒由聚合物包被，不会随时间而衰变；独立的快速诊断色谱卡(MAR Cassette)可直接插入MAR检测仪，为目前许多快速临床诊断试剂的整合提供了广泛的开发空间；而且还避免了操作过程中人员或仪器可能发生的交叉污染，提高了分析和过程的安全性。该技术继承了传统免疫层析法(胶体金，乳胶颗粒等)简便快速，单人份操作的优点，又弥补了传统免疫层析技术灵敏度低，只能定性，不能定量的缺点，代表了当今即时检验(Point of Care Test，POCT)技术发展的方向和潮流，一经问世，发展迅速，目前已经成为替代传统免疫层析技术的首选。

目前常用的标记磁颗粒为超顺磁颗粒(superPMPs)，没有外加磁场的情况下不具有任何磁性，只有在外加磁场作用下才会表现出磁性，商品化超顺磁颗粒都经过表面修饰，大大方便了标记过程，标记简便，重复性好。