[发明专利]微生物发酵法制备附桂骨痛复方的工艺

权利要求书

1.一种微生物发酵法制备具有消炎镇痛功能的中药的工艺，其特征在于，由以 下步骤完成：

1)按照附桂骨痛复方的比例称取各味药材，除淫羊藿为全草外，其余为10～ 20目粗粉；

2)用蒸馏水浸湿药材后灭菌；

3)接种10ml1.8*104个/ml黑曲霉，连续培养7天；

4)将发酵后的药材加热回流提取3次，加水量分别为药材重量的10，8，6 倍，提取时间依次为1.5h，0.75h，0.75h；

5)过滤步骤4)中所得提取液，4000r/min离心20min，合并3次提取液的上 清液，浓缩并定容至150mL；

所述的附桂骨痛复方为：附子14.5g、川乌7.5g、乳香7.5g、党参11.1g、白芍 11.1g、淫羊藿11.1g、当归11.1g。

2.如权利要求1所述的制备具有消炎镇痛功能的中药的工艺，其特征在于，所 述的黑曲霉液为由以下步骤制得的黑曲霉菌悬液：

1)按照营养琼脂45g，葡萄糖20g，蒸馏水1000ml的比例配制培养基，加热 煮沸，全部溶解后高压蒸汽灭菌，分别分装于于灭菌培养皿和三角瓶中，凝固得到 平板培养基和斜面培养基；

2)按照牛肉膏10g，蛋白胨10g，葡萄糖20g，氯化钠5g，蒸馏水1000ml的 比例配制培养液，加热煮沸，全部溶解后高压蒸汽灭菌，得到菌悬液培养液；

3)将黑曲霉接种于平板培养基上，30℃恒温倒置，活化培养3-4天；

4)平板培养基长满黑曲霉孢子后，在无菌条件下，将单个健康菌落接入到三 角瓶中的斜面培养基上，30℃恒温，扩大培养6-7天；

5)扩大培养后，在无菌条件下，向三角瓶中加入菌悬液培养液，用玻璃棒摩 擦菌落表面，将孢子打散成茶状菌液，菌液转于无菌试管，振荡8-10分钟，静置 30-40分钟，上层1/2菌液转于另一无菌试管，震荡1-2分钟，用滤纸过滤除去短 菌丝，将所得滤液振荡混匀1-2分钟，得到黑曲霉菌悬液；

6)在无菌条件下，将黑曲霉菌悬液吸取一滴至血球计数板，进行计数，不少 于1.8*104个/ml为合格。

3.由权利要求1所述方法制得的具有消炎镇痛功能的中药。