[发明专利]肠道病毒71型静注人免疫球蛋白及其制备方法

权利要求书

1.一种肠道病毒71型静注人免疫球蛋白，其特征在于可通过下列步骤制备：

a.中和试验法筛选出符合国家标准的献血者中，肠道病毒71型中和抗体效价滴度大 于等于1∶8的原料血浆；

b.每批次的混合原料血浆由不少于1000名供血浆者的原料血浆混合而成，以中和 试验法测混合原料血浆EV71抗体中和滴度，选择大于等于1∶32的用于制备肠道病毒71 型人免疫球蛋白；

c.混合后的血浆，在2℃下离心去除冷沉淀；

d.去除冷沉淀后的血浆用生理盐水稀释，用pH4.0醋酸缓冲液调节反应液pH值至 6.5，加95％乙醇至反应液中，使最终乙醇浓度为20％，使用冷媒控制反应液温度至-4.5℃， 板框压滤分离得沉淀；

e.将步骤d的沉淀用0℃ 0.01mol/LNaCl溶液搅拌溶解；

f.在步骤e所得产物的上清液中加50％乙醇形成反应液，使最终乙醇浓度为17％， 以醋酸缓冲液调节反应液的pH值至5.1，使用冷媒控制反应液温度至-4.5℃，板框压滤分 离除去沉淀，收集上清液；

g.将步骤f收集的上清液超滤透析四遍后上DEAE-Sepharose-Fast Flow弱阴离子交 换层析，反应液温度为10℃，收集流出液；

h.将步骤g的流出液进行再超滤，以醋酸缓冲液调节pH值至4.0，温度至10℃；

透析8遍后浓缩；

i.将步骤h的浓缩液用2mol/L的冰醋酸调pH至3.85，加入30％麦芽糖使最终浓 度在10％，补加生理盐水使蛋白含量为5.8％，得到原液；

j.将步骤i所得原液在24～25℃下孵放21天后用纳米膜过滤的双病毒灭活处理；

k.将步骤j所得肠道病毒71型静注人免疫球蛋白无菌分装。

2.根据权利要求1所述的肠道病毒71型静注人免疫球蛋白，其特征在于：所述EV71 病毒中和抗体效价大于等于1∶256，免疫球蛋白纯度大于等于总蛋白的95％。

3.根据权利要求2所述的肠道病毒71型静注人免疫球蛋白，其特征在于：所述免疫球 蛋白仅与抗人血清产生沉淀线，与抗马、牛、猪、羊血清不产生沉淀线。

4.根据权利要求3所述的肠道病毒71型静注人免疫球蛋白，其特征在于：所述免疫球 蛋白与正常人血清比较，主要沉淀线为IgG。

5.根据权利要求4所述的肠道病毒71型静注人免疫球蛋白，其特征在于：所述免疫球 蛋白的IgG单体及二聚体含量之和大于等于96％。

6.根据权利要求5所述的肠道病毒71型静注人免疫球蛋白，其特征在于：所述免疫球 蛋白的剂型为液体剂型或冻干剂型。

7.根据权利要求6所述的肠道病毒71型静注人免疫球蛋白，其特征在于：所述液体剂 型的规格为：50ml/瓶、100ml/瓶。